Հիմնական տարբերություն – Առաջ ընդդեմ հակադարձ այբբենարան
Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան (PCR) ԴՆԹ-ի ուժեղացման մեթոդ է, որն օգտագործվում է մոլեկուլային կենսաբանական կիրառություններում: Դա սովորաբար կիրառվող տեխնիկա է, որը կազմում է ԴՆԹ-ի հատկապես հետաքրքրված հաջորդականության միլիոնավորից միլիարդավոր պատճեններ: Դա in vitro մեթոդ է, որն իրականացվում է լաբորատորիաներում։ PCR տեխնիկան ամբողջովին կախված է առևտրային արտադրվող ԴՆԹ պոլիմերազից, որը կոչվում է Taq պոլիմերազ: Եվ նաև այն պահանջում է մի քանի այլ բաղադրիչներ և պատշաճ ջերմաստիճանի պահպանում: Կարևոր բաղադրիչը այբբենարաններն են: Պրայմերները ԴՆԹ-ի կարճ հաջորդականություններ են, որոնք հատուկ նախագծված են թիրախային ԴՆԹ հաջորդականության համար:Նրանք սովորաբար ունեն մոտ 20 նուկլեոտիդների երկարություն: Taq պոլիմերազը կատալիզացնում է նուկլեոտիդների ավելացումը նախկինում գոյություն ունեցող նուկլեոտիդային հաջորդականության մեջ: Այսպիսով, այբբենարանները ծառայում են որպես նոր թելերի սինթեզի մեկնարկային կետեր։ Taq պոլիմերազը գործում է միայն 5'-ից 3' ուղղությամբ, հետևաբար ԴՆԹ-ի սինթեզը տեղի է ունենում նույն 5'-ից 3' ուղղությամբ: Քանի որ ԴՆԹ-ն կրկնակի շղթա է, PCR-ում անհրաժեշտ են երկու տեսակի պրայմերներ: Նրանք հայտնի են որպես առաջնային այբբենարան և հակադարձ այբբենարան: Առաջ և հակադարձ պրայմերները կոչվում են՝ ելնելով ԴՆԹ-ում այբբենարանի երկարացման ուղղությունից, երբ տեղի է ունենում ԴՆԹ սինթեզ: Առաջնային այբբենարան կռվում է հակազգայուն ԴՆԹ շղթայի հետ և սկսում գենի +ve շղթայի սինթեզը 5'-ից 3' ուղղությամբ: Հակադարձ այբբենարանը կռվում է զգայական շղթայի հետ և սկսում է կոդավորող շղթայի լրացուցիչ շղթայի սինթեզը; որը –ve է գենի շարանը 5'-ից 3' ուղղությամբ: Սա հիմնական տարբերությունն է առաջ և հետադարձ այբբենարանների միջև:
Ի՞նչ է Forward Primer-ը:
Առաջ կողմնորոշումը գենի կոդավորման շղթայի կամ զգայական շղթայի սինթեզն է: Taq պոլիմերազը կատալիզացնում է նոր շղթայի սինթեզը 5'-ից 3' ուղղությամբ: Կոդավորող շղթայի սինթեզը տեղի է ունենում, երբ այբբենարանը միանում է ոչ կոդավորող կամ հակազգայական շղթայի հետ և երկարանում է 5'-ից 3' ուղղությամբ:
Նկար 01. Առաջ և հետադարձ այբբենարաններ
Այբբենարանը, որը զտվում է հակազգայական շղթայի կամ ոչ կոդավորող շղթայի կամ կաղապարի շղթայի հետ, հայտնի է որպես առաջնային այբբենարան, քանի որ առջևի այբբենարանը գործում է որպես գենի կոդավորման կամ դրական շղթայի սինթեզի մեկնարկային կետ: Առաջնային այբբենարան ունի կարճ նուկլեոտիդային հաջորդականություն, որը լրացնում է հակազգայական շղթայի 3-կողային ծայրին: Այն հիբրիդացվում է հակազգայական շղթայի հետ և հեշտացնում է Taq պոլիմերազին ավելացնել նուկլեոտիդներ, որոնք լրացնում են կաղապարի շարանը:
Ի՞նչ է հակադարձ այբբենարանը:
Հակադարձ այբբենարանը ԴՆԹ-ի կարճ հաջորդականությունն է, որը զտվում է զգայական շղթայի կամ կոդավորող շղթայի 3' ծայրով: Հակադարձ այբբենարանը ծառայում է որպես կոդավորման հաջորդականության կամ ոչ կոդավորող հաջորդականության լրացուցիչ շղթա սինթեզելու մեկնարկային կետ: Հակադարձ այբբենարանը նախագծված է որպես լրացնող կոդավորման շղթայի 3' ծայրին: Հետևաբար, այն կցվում է կոդավորման շղթայի կողային 3' ծայրով և թույլ է տալիս Taq պոլիմերազին սինթեզել հակազգայական շարանը կամ կաղապարի շարանը: Քանի որ դրա կողմնորոշումը հակառակ ձևով է, այս այբբենարանը պիտակավորված է որպես հակադարձ այբբենարան:
Եվ հակադարձ և առաջնային պրայմերները կարևոր են թիրախավորված կամ հետաքրքրված ԴՆԹ-ի որոշակի շրջանների միլիոնավորից միլիարդավոր պատճենների արտադրության համար:
Որո՞նք են նմանությունները առջևի և հակադարձ այբբենարանի միջև:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները պատրաստված են օլիգոնուկլեոտիդներից:
- Եվ առաջ և հակադարձ այբբենարանները ունեն կարճ նուկլեոտիդային հաջորդականություն, որը լրացնում է ԴՆԹ-ի կրկնակի շղթաների կողային ծայրերը:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները սովորաբար բաղկացած են 20 նուկլեոտիդից:
- Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիաներում օգտագործվում են և՛ առաջ, և՛ հակադարձ այբբենարաններ:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները սինթեզվում են կոմերցիոն եղանակով:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները ջերմաստիճանում կայուն են և սովորաբար ունեն նմանատիպ Tm:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները զտվում են թիրախային ԴՆԹ-ի հաջորդականությամբ:
- Եվ առջևի և հակադարձ այբբենարանները նախագծված են ըստ PCR ռեակցիաների:
- Եվ առաջ և հակադարձ այբբենարանները ծառայում են որպես ԴՆԹ-ի ուժեղացման մեկնարկային կետեր:
- Եվ հակադարձ և առաջնային այբբենարանները կարևոր են թիրախավորված կամ հետաքրքրված ԴՆԹ-ի հաջորդականությունների որոշակի շրջանների միլիոն օրինակների արտադրության համար:
Ո՞րն է տարբերությունը առջևի և հետադարձ այբբենարանի միջև:
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Forward primer-ը ԴՆԹ-ի կարճ հաջորդականությունն է, որը հիբրիդացվում է գենի ոչ կոդավորման կամ ձևանմուշային շղթայի 3' ծայրի հետ և ծառայում է որպես կոդավորման հաջորդականության սինթեզման մեկնարկային կետ: | Հակադարձ այբբենարանը ԴՆԹ-ի կարճ հաջորդականությունն է, որը հիբրիդացվում է կոդավորման 3' ծայրի կամ ոչ կաղապարային շղթայի հետ և ծառայում է որպես ոչ կոդավորող հաջորդականության սինթեզման մեկնարկային կետ: |
| Հալվող թել | |
| Առաջային այբբենարան կաղապարում է կաղապարով: | Հակադարձ այբբենարան կռվում է ոչ կաղապարով: |
| Արդյունքում նոր հաջորդականություն | |
| Forward primer-ը հեշտացնում է կոդավորման հաջորդականության սինթեզը: | Հակադարձ այբբենարանը հեշտացնում է ոչ կոդավորող հաջորդականության սինթեզը: |
Ամփոփում – Forward vs Reverse Primer
ՊՇՌ տեխնիկայի մեջ ներգրավված են երկու տեսակի պրայմերներ: Դրանք առաջնային և հակադարձ այբբենարաններ են: Հիմնվելով ԴՆԹ-ի նոր շղթայի սինթեզում այբբենարանի երկարացման վրա՝ այս այբբենարանները պիտակավորվում կամ անվանվում են: Taq պոլիմերազը սինթեզում է նոր ԴՆԹ-ն 5'-ից 3' կողմնորոշմամբ: Այսպիսով, այբբենարանները նախագծված են որպես կրկնակի թելերի 3' ծայրերին լրացնող: Առջևի այբբենարան, որը ձգվում է 5'-ից 3' ուղղությամբ, հիբրիդացվում է հակասիտորի կամ ձևանմուշի կամ չկոդավորող հաջորդականության 3' ծայրի հետ: Այն ծառայում է որպես կոդավորման հաջորդականության սինթեզման մեկնարկային կետ: Հակադարձ այբբենարանը, որը ձգվում է 5'-ից 3' ուղղությամբ, հիբրիդացվում է կոդավորման կամ ոչ կաղապարի կամ զգայական շղթայի 3' ծայրի հետ:Այն ծառայում է որպես ելակետ՝ չկոդավորող հաջորդականությունը սինթեզելու համար: Սա է տարբերությունը առաջ և հետադարձ այբբենարանի միջև:
