Միկրոմիջուկի և գիսաստղի հետազոտության հիմնական տարբերությունն այն է, որ միկրոմիջուկային վերլուծությունը կարևոր է քրոմոսոմային վնասը ստուգելու համար՝ որպես մուտագենի ազդեցության հետևանք, մինչդեռ գիսաստղերի վերլուծությունը կարևոր է առանձին բջիջներում ԴՆԹ-ի առաջնային վնասը հայտնաբերելու համար:
Գենոտոքսիկության անալիզները օգնում են գնահատել մուտացիաների և քրոմոսոմային անոմալիաների հնարավորությունները: Գենոտոքսինները ներառում են քիմիական նյութեր և ճառագայթում: Քաղցկեղածինները, մուտագենները և տերատոգենները գենոտոքսինների հիմնական կատեգորիաներն են: Նրանք առաջացնում են տարբեր վնասներ, ինչպիսիք են կետային մուտացիաները, ջնջումները, մեկ և կրկնակի շղթայի ընդմիջումները, քրոմոսոմային շեղումները, միկրոմիջուկների ձևավորումը, ԴՆԹ-ի վերականգնումը և բջջային ցիկլի փոխազդեցությունները:Նման պայմանները կարող են հանգեցնել մի շարք հիվանդությունների, և գենոտոքսիկության վերլուծությունները կանխում են այդ պայմանների հնարավոր վնասը: Միկրոնուկլեուսի և գիսաստղերի վերլուծությունը գենոտոքսիկության վերլուծության երկու տեխնիկա են:
Ինչ է Micronucleus Assay-ը:
Միկրոնուկլեուսի անալիզը քրոմոսոմային վնասը գնահատելու համար մուտագենի ազդեցության հետևանք է: Այն կարևոր է քիմիկատների զննման համար, որոնք առաջացնում են լիսեռի ձևավորում և միկրոմիջուկներ: Միկրոմիջուկային անալիզը տեղեկատվություն է տալիս քիմիական նյութերի կայունության մասին, երբ խանգարում են քրոմոսոմի կառուցվածքին և գործառույթին: Շատ քաղցկեղածիններ միկրոնուկլեուսի անալիզների ժամանակ դրական են դառնում: Վերլուծության գործընթացը ներառում է քիմիական բուժում և միկրոմիջուկային բջիջների հաճախականության չափում: Եթե միկրոմիջուկային բջիջների քանակի աննորմալ աճ կա, ապա այն եզրակացնում է, որ քիմիական նյութը առաջացնում է քրոմոսոմային վնաս:
Միկրոմիջուկային հետազոտություն սովորաբար իրականացվում է ակտիվորեն բաժանվող բջիջների վրա: Հետևաբար, բջիջների բաժանման միջոցով արտադրված էրիթրոցիտները և ոսկրածուծի ցողունային բջիջները իդեալական թեկնածուներ են նման վերլուծությունների համար:Նրանք ապրում են մշտական և արագ շրջանառություն: Քանի որ էրիթրոցիտները չունեն իրական միջուկներ, այն ավելի տեսանելի է դարձնում միկրոմիջուկային բջիջները հետազոտության վերջում:
Գծապատկեր 01. Միկրոնուկլեուսի վերլուծության դիտարկում
Միկրոմիջուկային անալիզները տնտեսող են, ավելի արագ, հարմար և պահանջում են ավելի քիչ հմտություններ՝ իրականացնելու համար: Դրանք արագորեն արտացոլում են քրոմոսոմային շեղումները հուսալի ձևով և չափազանց օգտակար են քրոմոսոմային վնասներն արագ գնահատելու համար: Միկրոմիջուկային վերլուծության հատուկ և բազմակողմանի տեսակ է ցիտոկինեզի բլոկային միկրոնուկլեուսի ցիտոմի (CBMNcyt) վերլուծությունը: Բջիջներում քրոմոսոմային վնասը և անկայունությունը չափելու համար նախընտրելի անալիզ է: Այնուամենայնիվ, միկրոմիջուկային վերլուծության օգտագործման հիմնական խնդիրն այն է, որ այն չի կարողանում որոշել տարբեր տեսակի քրոմոսոմային շեղումները, և վերլուծությունը ազդում է միտոտիկ արագության և բջիջների մահվան համամասնության վրա, ինչը հանգեցնում է արդյունքների փոփոխության:
Ի՞նչ է Comet Assay-ը:
Comet assay-ը, որը նաև հայտնի է որպես մեկ գելային էլեկտրոֆորեզի վերլուծություն, պարզ և զգայուն մեթոդ է ԴՆԹ-ի վնասը հայտնաբերելու համար: Այն չափում է ԴՆԹ-ի ընդմիջումները էուկարիոտիկ բջիջներում և ստանդարտ տեխնիկա է կենսամոնիթորինգի և գենոտոքսիկության փորձարկման համար:
Գիսաստղերի վերլուծությունը ներգրավված է ցածր հալման կետի ագարոզայի կասեցումներում բջիջների ինկապսուլյացիայի մեջ, չեզոք կամ ալկալային պայմաններում բջիջների լիզման և կասեցված լիզված բջիջների էլեկտրոֆորեզի մեջ: Ներկապսուլյացիայի գործընթացում բջիջները կասեցվում են հալված ցածր հալման կետով ագարոզայի մեջ, և ագարոզը ձևավորում է ածխաջրածին մանրաթելերի մատրիցա՝ դրանք տեղում ամրացնելու համար: Ագարոզը osmotically չեզոք է; հետևաբար, այն թույլ է տալիս լուծույթներին ներթափանցել գելի միջով և ազդել բջիջների վրա՝ առանց դրանք խանգարելու և տեղափոխելու: Լիզի լուծույթը բարձր խտացված աղի ջրային լուծույթ է և լվացող միջոց: Այս աղը խաթարում է սպիտակուցները և բջջի միացման ձևերը՝ միաժամանակ խաթարելով բջջի ՌՆԹ պարունակությունը:Բջիջները քայքայվում են, և բոլոր սպիտակուցները՝ ՌՆԹ-ն, ցիտոպլազմային և նուկլեոպլազմային բաղադրամասերը, խաթարվում և ցրվում են ագարոզային մատրիցում՝ թողնելով ԴՆԹ-ն։
Գծապատկեր 02. գիսաստղի վերլուծություն
Էլեկտրաֆորեզի լուծույթը ալկալային լուծույթ է, որտեղ ԴՆԹ-ի կրկնակի խխունջը փոխվում է, և նուկլեոիդը դառնում է միաշղթա: Այս գործընթացի ընթացքում պատկերները վերլուծելու համար կիրառվում է էլեկտրական դաշտ: Պատկերի վերլուծությունը չափում է ԴՆԹ-ի և նուկլեոիդի ֆլուորեսցենցիայի ընդհանուր ինտենսիվությունը և համեմատում է երկուսը: Ընդհանուր կառուցվածքը նման է գիսաստղի՝ շրջանաձև գլխով, որը համապատասխանում է մնացած չվնասված ԴՆԹ-ին և պոչը՝ վնասված ԴՆԹ-ի համար: Որքան ավելի պայծառ ու երկար է պոչը՝ ավելի ուժեղ ազդանշանների շնորհիվ, այնքան բարձր է վնասի մակարդակը։
Որո՞նք են նմանությունները Micronucleus-ի և Comet Assay-ի միջև:
- Միկրոմիջուկը և գիսաստղի վերլուծությունը խնայող են, ավելի արագ, հարմար և պահանջում են ավելի քիչ հմտություններ:
- Դրանք հիմնականում կատարվում են ԴՆԹ-ի վրա։
- Երկու անալիզներն էլ օգնում են գնահատել մուտացիաները և քրոմոսոմային անոմալիաները:
- Ավելին, երկու մեթոդներն էլ օգտագործում են քիմիական նյութեր ընթացակարգն իրականացնելու համար:
Ո՞րն է տարբերությունը միկրոմիջուկի և գիսաստղի վերլուծության միջև:
Միկրոմիջուկային վերլուծությունը կարևոր է մուտագենի ազդեցության հետևանքով քրոմոսոմային վնասը ստուգելու համար, մինչդեռ գիսաստղերի վերլուծությունը կարևոր է առանձին բջիջներում ԴՆԹ-ի առաջնային վնասը հայտնաբերելու համար: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է միկրոմիջուկի և գիսաստղի փորձարկման միջև: Բացի այդ, միկրոմիջուկային վերլուծությունը լավ հաստատված է կլաստոգենությունը և անավգենիկությունը հայտնաբերելու համար: Գիսաստղի անալիզը օգտագործվում է որպես գենոտոքսիկության թեստ՝ բջիջներում ԴՆԹ-ի առաջնային վնասը հայտնաբերելու համար: Ավելին, միկրոմիջուկային վերլուծությունը տեղեկատվություն է տրամադրում քիմիական նյութերի կայունության մասին, մինչդեռ գիսաստղային վերլուծությունը մեկ բջջային գելային էլեկտրոֆորեզ է:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ներկայացնում է միկրոմիջուկի և գիսաստղի վերլուծության տարբերությունները աղյուսակային տեսքով՝ կողք կողքի համեմատության համար:
Ամփոփում – Micronucleus vs Comet Assay
Գենոտոքսիկության անալիզները օգնում են գնահատել մուտացիաների և քրոմոսոմային անոմալիաների հնարավորությունները: Միկրոնուկլեուսի վերլուծությունը և գիսաստղերի վերլուծությունը գենոտոքսիկության վերլուծության երկու տեխնիկա են: Միկրոնուկլեուսի վերլուծությունը գնահատում է քրոմոսոմային վնասը որպես մուտագենի ազդեցության հետևանք: Գիսաստղի վերլուծությունը պարզ և զգայուն մեթոդ է ԴՆԹ-ի վնասը հայտնաբերելու համար: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է միկրոմիջուկի և գիսաստղի փորձարկման միջև: Միկրոնուկլեուսի անալիզը կարևոր է քիմիկատների հայտնաբերման համար, որոնք առաջացնում են լիսեռի ձևավորում և միկրոմիջուկներ: Comet-ի վերլուծությունը ներգրավված է ցածր հալման կետի ագարոզայի կասեցումներում բջիջների ինկապսուլյացիայի մեջ, չեզոք կամ ալկալային պայմաններում բջիջների լիզմանը և կասեցված լիզված բջիջների էլեկտրոֆորեզին:
