Հիմնական տարբերություն – Թուղթ ընդդեմ բարակ շերտի ընդդեմ սյունակի քրոմատագրության
Թղթային քրոմատոգրաֆիան, բարակ շերտի քրոմատոգրաֆիան և սյունակային քրոմատոգրաֆիան քրոմատոգրաֆիական տեխնիկայի երեք տեսակ են: Թղթային քրոմատոգրաֆիայի, բարակ շերտի քրոմատոգրաֆիայի և սյունակային քրոմատագրության միջև հիմնական տարբերությունը հիմնված է քրոմատոգրաֆիայի տեխնիկայում օգտագործվող ստացիոնար փուլի տեսակի վրա: Թղթային քրոմատոգրաֆիան որպես անշարժ փուլ օգտագործում է ցելյուլոզային թուղթ, բարակ շերտով քրոմատագրությունը օգտագործում է կավահող կամ սիլիկա գել՝ որպես անշարժ փուլ, մինչդեռ սյունակային քրոմատոգրաֆիան օգտագործում է համապատասխան մատրիցային նյութով փաթեթավորված սյունակ՝ որպես անշարժ փուլ:
Կենսամոլեկուլների առանձնացման և նույնականացման գործընթացում, ինչպիսիք են սպիտակուցները և ածխաջրերը, քրոմատագրությունը կարևոր կենսաֆիզիկական տեխնիկա է, որն օգտագործվում է: Քրոմատոգրաֆիան առանձնացնում է միացությունները՝ հիմնվելով դրանց լուծելիության, չափի և լիցքի վրա: Ելնելով տարանջատման մեխանիզմից՝ քրոմատոգրաֆիան օգտագործում է այնպիսի մեխանիզմներ, ինչպիսիք են իոնների փոխանակումը, կլանումը, բաժանումը և չափի բացառումը, և կան երեք քրոմատոգրաֆիկ տեխնիկա. այն է՝ թուղթ, բարակ շերտ և սյունակային քրոմատագրություն։ Թղթային քրոմատոգրաֆիան հիմնված է միացության պինդ-հեղուկ կլանման և լուծելիության վրա, և որպես անշարժ փուլ այն օգտագործում է ցելյուլոզային թուղթ: Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիան հիմնված է մոլեկուլների պինդ-հեղուկ կլանման վրա: Այն ունի անշարժ փուլ, որը սովորաբար պատրաստված է կավահողից կամ սիլիկա գելից, և շարժական փուլը, որը լուծիչն է: Սյունակային քրոմատոգրաֆիան օգտագործում է մատրիցով լցված սյունակ, որն օգտագործվում է մոլեկուլները առանձնացնելու համար՝ հիմնականում ելնելով դրանց չափից, մերձությունից կամ լիցքից:
Ի՞նչ է թղթային քրոմատոգրաֆիան:
Թղթային քրոմատոգրաֆիան օգտագործվող քրոմատոգրաֆիայի ամենապարզ տեսակն է, և այն չի օգտագործվում լայնածավալ հետազոտությունների համար: Այն հիմնականում օգտագործվում է ուսանողական լաբորատորիաներում՝ հայտնաբերելու կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են ամինաթթուները և ածխաջրերը, որոնք առկա են խառնուրդներում: Թղթային քրոմատոգրաֆիան օգտագործում է ստացիոնար փուլ, որը պատրաստվում է ցելյուլոզային թղթի կամ Whatman ֆիլտրի թղթի միջոցով, և շարժական փուլ, որը սովորաբար պատրաստվում է օրգանական լուծիչներով, ինչպիսիք են n-բուտանոլը և այլն: Այսպիսով, երբ միացությունները խայտաբղետ են և թույլ են տալիս աշխատել շարժական փուլի առկայության դեպքում, կախված միացությունների լուծելիությունից, դրանք բաժանվում են: Այսպիսով, քրոմատոգրամի մշակումից հետո կարելի է ներկել՝ յուրաքանչյուր միացության երկարությունը որոշելու համար: Դրանով կարելի է հաշվարկել պահպանման գործակիցը։
Նկար 01. Թղթային քրոմատոգրաֆիա
Թղթային քրոմատոգրաֆիան կարող է հետագայում դասակարգվել որպես աճող թղթային և նվազող թղթային քրոմատոգրաֆիա՝ կախված հոսող լուծիչի ուղղությունից:
Ի՞նչ է բարակ շերտային քրոմատոգրաֆիան:
Բարակ շերտի քրոմատոգրաֆիան կամ TLC-ն սովորաբար օգտագործվող տեխնիկա է խառնուրդում առկա տարբեր ամինաթթուների նույնականացման կամ սպիտակուցների նույնականացման համար: Տարանջատման տեխնիկան հիմնված է պինդ-հեղուկ կլանման վրա: Բարակ շերտով քրոմատագրության ժամանակ որպես անշարժ փուլ օգտագործվում է կավահողից կամ սիլիկա գելից պատրաստված թիթեղը։ Լուծիչների խառնուրդը տատանվում է ըստ պահանջների և կարող է օգտագործել օրգանական միացությունների տարբեր համակցություններ, ինչպիսիք են n-բուտանոլը, քացախաթթուն և ջուրը լուծիչը պատրաստելու համար: Բաժանման ենթակա միացությունները բծավորվում են ափսեի վրա և ընկղմվում լուծիչների խառնուրդի մեջ: Երբ լուծիչը շարժվում է դեպի վեր՝ ափսեի կողմից տրված մազանոթային գործողության հիման վրա, ափսեի վրա հայտնաբերված միացությունները նույնպես շարժվում են՝ կախված լուծիչում իրենց լուծելիությունից:
Նկար 02. բարակ շերտով քրոմատագրություն
Քրոմատոգրամայից հետո բծերի հայտնաբերումը կատարվում է ներկման տարբեր պրոցեդուրաներով: Ոմանք օգտագործում են նինհիդրինով ներկում, որը ներկելու բավականին թունավոր մեթոդ է: Ժամանակակից բարակ շերտով քրոմատոգրամները օգտագործում են ֆլյուորեսցենտային տեխնիկա՝ վազքից հետո քրոմատոգրամը դիտելու համար: Կախված նրա անցած տարածություններից՝ յուրաքանչյուր միացության պահպանման ժամանակը կարող է հաշվարկվել։ Սա կարող է օգտագործվել օգտագործվող խառնուրդի հիման վրա առանձնացված միացության տեսակը որոշելու համար: TLC-ն հիմնականում օգտագործվում է սպիտակուցային խառնուրդում ամինաթթուները հայտնաբերելու, ինչպես նաև խառնուրդում առկա մոնոսաքարիդների տարբեր տեսակներ առանձնացնելու համար:
Ի՞նչ է սյունակի քրոմատոգրաֆիան:
Սյունակային քրոմատոգրաֆիան լայն տերմին է, որն օգտագործվում է քրոմատոգրաֆիայի բազմաթիվ տեսակների նկարագրության համար, որոնք օգտագործում են սյունակի վրա հիմնված տարանջատման մեթոդը:Սյունակային քրոմատագրության մեջ ֆիզիկական սյունակ օգտագործվում է փաթեթավորման նյութի հետ միացությունները բաժանելու համար: Տարանջատումը կարող է հիմնված լինել միացությունների կողմից դրսևորվող տարբեր ֆիզիկական հատկությունների վրա: Այս հատկությունները կարող են լինել լիցքը, չափը, 3D կոնֆորմացիան և կապող հզորությունը և այլն: Այսպիսով, մատրիցային նյութով լցված սյունակը գործում է որպես անշարժ փուլ, իսկ լվացման բուֆերը, որը կիրառվում է սյունակի վրա, գործում է որպես շարժական փուլ:
Եթե մոլեկուլները բաժանվում են չափի հիման վրա, փաթեթավորող նյութը փաթեթավորվում է այնպես, որ այն թողնում է ծակոտիներ միացությունների միջով անցնելու համար: Այսպիսով, ավելի մեծ մոլեկուլները, որոնք չեն կարող հոսել ծակոտիների միջով, առաջին հերթին կլանում են, մինչդեռ փոքր մոլեկուլներին շատ ավելի երկար ժամանակ է պահանջվում:
Նկար 03. Սյունակի քրոմատագրություն
Եթե մոլեկուլները բաժանվեն իրենց լիցքի հիման վրա, անշարժ փուլը կպարունակի կա՛մ անիոն, կա՛մ կատիոնափոխանակիչ, որին միացությունները կներգրավվեն՝ ելնելով իրենց լիցքից: Այսպիսով, լվացման փուլի ընթացքում չկապված միացությունները կթափվեն: Էլյուցիոն բուֆեր ավելացնելուց հետո կապված լիցքավորված միացությունները կթափվեն: Այս էլուենտների հայտնաբերումը հիմնականում հիմնված է սպեկտրոֆոտոմետրիկ տեխնիկայի վրա։
Որո՞նք են նմանությունները թղթի բարակ շերտի և սյունակի քրոմատագրության միջև:
- Բոլոր թղթի բարակ շերտով և սյունակով քրոմատագրման երեք տեխնիկան օգտագործվում է կենսամոլեկուլների առանձնացման համար, ինչպիսիք են ամինաթթուները, սպիտակուցները և ածխաջրերը:
- Թղթի բարակ շերտով և սյունակի քրոմատագրման տեխնիկան ունի շարժական և անշարժ փուլ:
- Թուղթ բարակ շերտով և սյունակի քրոմատագրման տեխնիկան օգտագործում է կենսաֆիզիկական մեխանիզմներ տարանջատման համար:
Ո՞րն է տարբերությունը թղթի բարակ շերտի և սյունակի քրոմատագրության միջև:
Թուղթ ընդդեմ բարակ շերտի ընդդեմ սյունակի քրոմատագրության |
|
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Թղթային քրոմատոգրաֆիան քրոմատոգրաֆիկ տեխնիկա է, որն օգտագործվում է միացությունների առանձնացման համար՝ հիմնված հեղուկ-հեղուկ կլանման և միացության լուծելիության վրա: Որպես անշարժ փուլ այն օգտագործում է ցելյուլոզային թուղթ: |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիան մեկ այլ քրոմատոգրաֆիկ տեխնիկա է, որը հիմնված է մոլեկուլների պինդ-հեղուկ կլանման վրա: Այն ունի անշարժ փուլ՝ պատրաստված ալյումինից կամ սիլիկա գելից և լուծիչ՝ որպես շարժական փուլ, որը լուծիչն է։ |
| Սյունակի քրոմատագրություն | Սյունակային քրոմատոգրաֆիան օգտագործում է մատրիցով փաթեթավորված սյունակ, որն օգտագործվում է մոլեկուլները առանձնացնելու համար՝ հիմնականում հիմնվելով դրանց չափի, հարաբերակցության կամ դրա լիցքի վրա: |
| Ստացիոնար փուլ | |
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Watman-ի նիտրոցելյուլոզայից պատրաստված թուղթն օգտագործվում է որպես թղթի քրոմատագրության ստացիոնար փուլ: |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Ալումինա կամ սիլիցի գել օգտագործվում է որպես բարակ շերտի քրոմատագրության ստացիոնար փուլ: |
| Սյունակի քրոմատագրություն | Համապատասխան փաթեթավորող նյութով փաթեթավորված սյունակ օգտագործվում է որպես սյունակի քրոմատագրության ստացիոնար փուլ: |
| Բջջային փուլ | |
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Հոսող լուծիչը թղթի քրոմատագրության շարժական փուլն է: |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Հոսող լուծիչը բարակ շերտի քրոմատագրության շարժական փուլն է: |
| Սյունակի քրոմատագրություն | Լվացքի բուֆերը սյունակի քրոմատոգրաֆիայի շարժական փուլն է: |
| Մեխանիզմներ, որոնք օգտագործվում են տարանջատման համար | |
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Թղթային քրոմատոգրաֆիան հիմնված է պինդ հեղուկի կլանման վրա։ |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Բարակ շերտի քրոմատոգրաֆիան հիմնված է պինդ-հեղուկի կլանման վրա։ |
| Սյունակի քրոմատագրություն | Սյունակի քրոմատոգրաֆիան հիմնված է չափի բացառման, լիցքի և ձևի վրա: |
| Elution Buffer | |
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Չի պահանջվում թղթային քրոմատագրմամբ: |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Պահանջվում չէ բարակ շերտով քրոմատագրման համար: |
| Սյունակի քրոմատագրություն | պահանջվում է սյունակային քրոմատոգրաֆիայում: |
| Հայտնաբերում | |
| Թղթային քրոմատոգրաֆիա | Գունավորում և պահպանման գործակիցը որոշելով: |
| Բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիա | Գունավորում և պահպանման գործակիցը որոշելով: |
| Սյունակի քրոմատագրություն | Սպեկտրաֆոտոմետրիկ որոշում. |
Ամփոփում – Թուղթ բարակ շերտ ընդդեմ սյունակի քրոմատագրության
Թղթային քրոմատոգրաֆիան, TLC և սյունակային քրոմատոգրաֆիան առանձնացման մեթոդներ են, որոնք օգտագործվում են կենսամոլեկուլների առանձնացման համար, ինչպիսիք են սպիտակուցները, ամինաթթուները և ածխաջրերը (հիմնականում մոնոսաքարիդները):Թղթային քրոմատագրությունը օգտագործում է ցելյուլոզային թուղթ՝ որպես անշարժ փուլ, իսկ տարանջատման մեխանիզմը հիմնված է պինդ-հեղուկ կլանման վրա։ TLC-ն օգտագործում է նաև պինդ-հեղուկ կլանման մեխանիզմներ: Մոլեկուլները բաժանվում են ստացիոնար փուլում՝ կախված շարժական փուլում դրանց լուծելիությունից։ Սյունակի քրոմատոգրաֆիան առանձնացման համար օգտագործում է ֆիզիկական հատկություններ, ինչպիսիք են չափը, ձևը, լիցքը և միացության մոլեկուլային քաշը: Մատրիցային նյութով լցված սյունակը գործում է որպես անշարժ փուլ, մինչդեռ լվացքի բուֆերը գործում է որպես լուծիչ փուլ: Սա է տարբերությունը թղթի բարակ շերտի և սյունակային քրոմատոգրաֆիայի միջև:
