T4 ԴՆԹ լիգազի և E. coli ԴՆԹ լիգազի հիմնական տարբերությունն այն է, որ T4 ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է բակտերիոֆագ T4-ից, մինչդեռ E. coli ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է E. coli բակտերիայից:.
ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտի հատուկ տեսակ է, որը հեշտացնում է ԴՆԹ-ի շղթաների միացումը՝ ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորման միջոցով: Այն կարևոր դեր է խաղում կենդանի օրգանիզմների ԴՆԹ-ում միաշղթաների և երկշղթա ճեղքերի վերականգնմամբ։ Ավելին, ԴՆԹ լիգազան օգտագործվում է ինչպես ԴՆԹ-ի վերականգնման, այնպես էլ ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ: Բացի վերը նշված կիրառություններից, ԴՆԹ-ի լիգազան լայն կիրառություն ունի նաև մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում, ինչպիսիք են ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիան:T4 ԴՆԹ լիգազան և E. coli ԴՆԹ լիգազան ԴՆԹ լիգազի ֆերմենտների երկու տեսակ են:
Ի՞նչ է T4 ԴՆԹ լիգազան:
T4 լիգազան ԴՆԹ-ի միացնող ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է բակտերիոֆագ T4-ից: T4 բակտերիոֆագը վիրուս է, որը վարակում է Escherichia coli-ն: T4 լիգազի ֆերմենտը մոլեկուլային կենսաբանական լաբորատոր հետազոտություններում ամենատարածված ԴՆԹ լիգազան է: Սովորաբար, T4 լիգազան կատալիզացնում է երկշղթա ԴՆԹ-ի երկու համակցված կամ բութ շղթաների միացումը հարակից նուկլեոտիդների 5' ֆոսֆատ և 3' հիդրօքսիլ խմբերի միջև: Այն կարող է նաև կատալիզացնել ՌՆԹ-ի միացումը կամ ԴՆԹ-ին կամ ՌՆԹ-ի շղթային դուպլեքս մոլեկուլում: Այնուամենայնիվ, այս ֆերմենտը չի միանա միաշղթա նուկլեինաթթուներին: Ավելին, այն կարող է նաև կապել բութ ծայրերով ԴՆԹ-ն շատ ավելի մեծ արդյունավետությամբ, քան E. coli ԴՆԹ լիգազան:
Գծապատկեր 01. T4 ԴՆԹ լիգազ
Այս ֆերմենտը պահանջում է ATP որպես կոֆակտոր: Գենետիկական ինժեներիայի որոշ հետազոտական փորձեր արդեն արտադրել են ավելի ակտիվ ԴՆԹ լիգազի ֆերմենտներ, քան վայրի տիպի T4 ԴՆԹ լիգազան: Մոտեցումներից մեկում նրանք ստեղծեցին միաձուլման ֆերմենտի մոլեկուլ՝ T4 ԴՆԹ լիգազան զուգակցելով p50 կամ NF-kB մոլեկուլին: Այս նոր T4 լիգազի ֆերմենտը 160%-ով ավելի ակտիվ էր կլոնավորման նպատակներով բութ կապումներում, քան վայրի տիպի T4 ԴՆԹ լիգազան: Ավելին, T4 ԴՆԹ լիգազի օպտիմալ ջերմաստիճանը կապակցման ռեակցիան ավելի ճշգրիտ կատալիզացնելու համար 16 °C է:
Ի՞նչ է E Coli DNA Ligase-ը:
E. coli ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է E. coli բակտերիայից: E. coli ԴՆԹ լիգազի ստեղծման համար պատասխանատու գենը lig գենն է: E. coli-ի ԴՆԹ-ն, լիգազան, ինչպես նաև պրոկարիոտների ԴՆԹ-լիգազների մեծ մասը, օգտագործում են էներգիա, որը ստացվում է NAD-ով (նիկոտինամիդ ադենին դինուկլեոտիդ)՝ ֆոսֆոդիեսթեր կապ ստեղծելու համար:
Գծապատկեր 02. E. Coli ԴՆԹ լիգազի
E. coli ԴՆԹ լիգազան կապակցման ֆերմենտ է, որը կարող է միացնել ԴՆԹ-ի բեկորները՝ կատալիզացնելով ֆոսֆոդիստերային կապերի ձևավորումը երկշղթա ԴՆԹ-ի բեկորների միջև, որոնք պարունակում են 5' ֆոսֆատ եզրեր և 3' հիդրօքսիլ եզրեր: Ավելին, այն չի կապում բութ ծայրերով ԴՆԹ-ն, բացառությամբ հատուկ պայմանների, ինչպիսիք են մոլեկուլային կուտակումը պոլիէթիլեն գլիկոլով: Այն նաև չի կարող արդյունավետ կերպով միացնել ՌՆԹ-ն ԴՆԹ-ին: Ավելին, E. coli ԴՆԹ լիգազի ակտիվությունը կարող է ուժեղացվել ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի առկայությամբ ճիշտ կոնցենտրացիայով: Այնուամենայնիվ, երբ ԴՆԹ պոլիմերազ 1 ֆերմենտի կոնցենտրացիան ավելի բարձր է, այն բացասաբար է ազդում E. coli ԴՆԹ լիգազի ակտիվության վրա:
Որո՞նք են նմանությունները T4 DNA Ligase-ի և E Coli DNA Ligase-ի միջև:
- T4 ԴՆԹ լիգազան և E-coli ԴՆԹ լիգազան ԴՆԹ լիգազի ֆերմենտների երկու տեսակ են:
- Երկուսն էլ ամինաթթուներից կազմված սպիտակուցներ են։
- Այս ֆերմենտները կատալիզացնում են ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորումը զուգակցված 5' ֆոսֆատի և 3' հիդրօքսիլ վերջնակետերի միջև դուպլեքս ԴՆԹ-ում:
- Նրանք լայն կիրառություն ունեն մոլեկուլային կենսաբանության փորձերում, ինչպիսիք են ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիան:
Ո՞րն է տարբերությունը T4 DNA Ligase-ի և E Coli DNA Ligase-ի միջև:
T4 ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է բակտերիոֆագ T4-ից, մինչդեռ E. coli ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է E. coli բակտերիայից: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է T4 ԴՆԹ լիգազի և E. coli ԴՆԹ լիգազի միջև: Ավելին, T4 ԴՆԹ լիգազի էներգիայի աղբյուրը ATP-ն է: Մյուս կողմից, E. coli ԴՆԹ լիգազի էներգիայի աղբյուրը NAD-ն է։
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ներկայացնում է T4 ԴՆԹ լիգազի և E coli ԴՆԹ լիգազի տարբերությունները աղյուսակային տեսքով՝ կողք կողքի համեմատելու համար:
Ամփոփում – T4 DNA Ligase vs E Coli DNA Ligase
T4 ԴՆԹ-լիգազը և E. coli ԴՆԹ լիգազան երկու ֆերմենտներ են, որոնք կատալիզացնում են ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորումը միաձուլված 5' ֆոսֆատի և 3' հիդրօքսիլ վերջնակետերի միջև դուպլեքս ԴՆԹ-ում: T4 լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է բակտերիոֆագ T4-ից, մինչդեռ E. coli ԴՆԹ լիգազան ֆերմենտ է, որը մեկուսացված է E. coli բակտերիայից: Այսպիսով, սա է հիմնական տարբերությունը T4 ԴՆԹ լիգազի և E coli ԴՆԹ լիգազի միջև:
