Հիմնական տարբերություն – T4 vs T7 DNA Ligase
ԴՆԹ լիգազը կարևոր ֆերմենտ է, որն օգտագործվում է մոլեկուլային կենսաբանության տեխնիկայում: Այն գործում է որպես մոլեկուլային սոսինձ՝ նուկլեոտիդներին միացնելու համար՝ նուկլեոտիդների միջև ֆոսֆոդիստերային կապեր ձևավորելով։ Ֆոսֆոդիստերային կապերը ձևավորվում են շաքարավազի մասի 3' հիդրօքսիլ վերջի և 5' ծայրի ֆոսֆատ խմբի միջև: ԴՆԹ-ի լիգազան կենսական նշանակություն ունի վերարտադրման գործընթացում՝ հետամնաց շղթայի Okazaki-ի բեկորներին միանալու և ԴՆԹ-ի վերականգնման մեխանիզմների և in vitro կլոնավորման փորձերի ժամանակ՝ վեկտորի գենոմին հետաքրքրող ցանկալի գենը միացնելու համար: Ներկայումս մոլեկուլային կենսաբանների կողմից օգտագործվում են երկու հիմնական ԴՆԹ լիգաներ՝ T4 և T7 ԴՆԹ լիգազաներ:T4 ԴՆԹ լիգազան T4 բակտերիոֆագից մեկուսացված առաջին ֆերմենտներից մեկն է: T7 ԴՆԹ լիգազան, որն ավելի փոքր սպիտակուց է, T7 բակտերիոֆագից մեկուսացված ֆերմենտ է: Սա է հիմնական տարբերությունը T4 և T7 ԴՆԹ լիգազի միջև:
Ի՞նչ է ԴՆԹ-ի լիգազի գործողությունը:
ԴՆԹ-ի կապումը տեղի է ունենում եռաստիճան ռեակցիայի մեջ: Առաջին քայլը նուկլեոֆիլային հարձակումն է ATP-ի ալֆաֆոսֆորի վրա, որն առաջացնում է կովալենտային ֆերմենտ-ադենիլատ միջանկյալ նյութ, որտեղ AMP-ը կապված է լիզինի տերմինալ կողային շղթայի ազոտի հետ: Երկրորդ քայլում նուկլեոֆիլ հարձակում է տեղի ունենում ֆերմենտի ֆոսֆորի վրա 5'-ֆոսֆատով ավարտված ԴՆԹ-ի սուբստրատի միջոցով, որն ազատում է լիզին և ձևավորում ԴՆԹ-ադենիլատ: Վերջնական փուլում ԴՆԹ-ադենիլատը հարձակվում է ԴՆԹ-ի մեկ այլ շղթայի 3'- OH-ի կողմից՝ ազատելով AMP և միանալով պոլինուկլեոտիդներին:
Ի՞նչ է T4 DNA Ligase?
T4 Ligase-ն առաջին լիգազանն էր, որը մեկուսացվել և նույնացվել է Մեսելսոնի, Վեյգլի և Քելենբերգերի կողմից և եղել է երբևէ արտադրված առաջին առևտրային լիգազան:T4 ԴՆԹ լիգազան ATP-ից կախված ֆերմենտ է, որը կատալիզացնում է ֆոսֆոդիեսթեր կապի ձևավորումը: Այն 487 ամինաթթուների մնացորդներով մեկ պոլիպեպտիդային շղթա է և ունի մոտ 77 կԴա մոլեկուլային քաշ: Նրա գործունեության համար օպտիմալ pH-ը գտնվում է 7,5 – 8 միջակայքում:
Գծապատկեր 01. T4 ԴՆԹ լիգազ
T4 ԴՆԹ լիգազան, ինչպես ենթադրում է նրա անունը, առկա է T4 բակտերիոֆագում և մեկուսացվել է, երբ ֆագը արտադրել է ֆերմենտը E. coli-ով վարակվելուց հետո: Ֆերմենտը կապում է բութ ծայրերով կրկնակի շղթա ունեցող ԴՆԹ-ի դուպլեքսները, և կապվող բեկորները պետք է լինեն միմյանց մոտ:
Ի՞նչ է T7 ԴՆԹ լիգազան:
T7 լիգազան 41 կԴա սպիտակուց է, որը արտադրվում է T7 բակտերիոֆագի կողմից և մեկուսացվում է E. coli բջիջները վարակելով: T7 լիգազի հիմնական գործառույթն է կապել ԴՆԹ-ի դուպլեքսները ֆոսֆոդիստերային կապերի միջոցով և միացնել ԴՆԹ-ի մոտակա բեկորները կլոնավորման փորձերի ժամանակ:T7 ԴՆԹ լիգազի օպտիմալ pH-ը գտնվում է 7,0 – 7,2 միջակայքում: T7 լիգազան կախված է ATP-ից: T7 ԴՆԹ-ի լիգաները նաև ունակ են կռելու ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի հիբրիդները՝ տրանսկրիպցիայի ընթացքում առաջացնելով աննորմալ կոնֆորմացիաներ։ Այնուամենայնիվ, այս երևույթը դեռևս գտնվում է in vitro ուսումնասիրությունների հետազոտության փուլում:
Որո՞նք են նմանությունները T4 և T7 DNA Ligase-ի միջև:
- T4 և T7 ԴՆԹ-ի լիգազան մասնակցում են կապակցման ռեակցիային՝ կռելով ԴՆԹ-ի դուպլեքսները ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորման միջոցով ԴՆԹ-ի հատվածի 3' OH վերջի և 5' ֆոսֆատային ծայրի միջև:
- Երկու ֆերմենտներն էլ կապում են բութ ծայրերով ԴՆԹ-ի դուպլեքսները, որոնք գտնվում են միմյանց մոտ:
- Երկու ֆերմենտներն էլ կախված են ATP-ից:
- Այս ֆերմենտները մեկուսացվում են E. coli բջիջները վարակելով որոշակի բակտերիոֆագով:
- Երկու ֆերմենտների կիրառությունները ներառում են՝
- Մոլեկուլային կլոնավորում – հետաքրքրող գենը վեկտորին միացնելու համար
- ԴՆԹ-ի վերանորոգում – կրկնակի շղթայված խորշերը վերանորոգելու համար
- In vitro ԴՆԹ-ի վերարտադրություն
- Լիգազի շղթայական ռեակցիա
Ո՞րն է տարբերությունը T4 և T7 ԴՆԹ լիգազի միջև:
T4 vs T7 ԴՆԹ լիգազի |
|
| T4 ԴՆԹ Լիգազի տեսակ ԴՆԹ-լիգազի տեսակ, որը մեկուսացված է T4 բակտերիոֆագից և մասնակցում է հարակից ԴՆԹ-ի բեկորների միացմանը ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորման միջոցով: | T7 ԴՆԹ Լիգազի տեսակ ԴՆԹ լիգազի տեսակ, որը մեկուսացված է T7 բակտերիոֆագից և մասնակցում է հարակից ԴՆԹ-ի բեկորների կապակցմանը ֆոսֆոդիստերային կապի ձևավորման միջոցով: |
| Սպիտակուցի չափը | |
| T4 ԴՆԹ լիգազի չափը 77 կԴա է՝ ավելի մեծ՝ համեմատած T7 ԴՆԹ լիգազի հետ։ | T7 ԴՆԹ լիգազի չափը 41 կԴա է։ |
| Օպտիմալ pH | |
| pH միջակայքը, որն աշխատում է T4 ԴՆԹ լիգազի վրա, 7,5 – 8,0 է: | pH միջակայքը, որն աշխատում է T7 ԴՆԹ լիգազի վրա, 7,0 – 7,2 է: |
Ամփոփում – T4 vs T7 DNA Ligase
ԴՆԹ-ի լիգաները ֆերմենտների կարևոր դաս են, որոնք ներգրավված են մոլեկուլային կլոնավորման մեջ՝ ստեղծելով հետաքրքրող գենը պարունակող ԴՆԹ-ի ռեկոմբինանտ մոլեկուլներ: Կապակցման ռեակցիան էներգիան օգտագործող ռեակցիա է, և կան նոր հետազոտական ուսումնասիրություններ՝ մատչելի լիգաների մոդուլավորման միջոցով ճշգրտությունը բարելավելու համար: T4 և T7 ԴՆԹ լիգաները երկու տեսակի կարևոր ԴՆԹ լիգազի ֆերմենտներ են, որոնք օգտագործվում են մոլեկուլային կենսաբանական տեխնիկայում: T7 ԴՆԹ լիգազան նույնպես հետազոտության արդյունք է, որը հիմնված է T4 վարակված E. coli-ից մեկուսացված առաջնային լիգազի վրա: T7-ն ավելի մեծ արդյունավետություն և ճշգրտություն է ցուցադրում իր գործառույթն իրականացնելիս՝ իր փոքր չափսերի շնորհիվ: Սա է տարբերությունը T4 և T7 լիգազի միջև:
Ներբեռնեք T4 vs T7 DNA Ligase-ի PDF տարբերակը
Դուք կարող եք ներբեռնել այս հոդվածի PDF տարբերակը և օգտագործել այն անցանց նպատակներով՝ ըստ մեջբերումների: Խնդրում ենք ներբեռնել PDF տարբերակը այստեղ Տարբերությունը T4-ի և T7 Ligase-ի միջև:
