Coomassie-ի և արծաթի ներկման հիմնական տարբերությունն այն է, որ coomassie ներկումը սպիտակուցի ներկման տեխնիկան է, որն օգտագործում է coomassie փայլուն կապույտ բիծ, մինչդեռ սլիվեր ներկումը սպիտակուցի ներկման տեխնիկա է, որն օգտագործում է արծաթե բիծ:
Սպիտակուցների տարանջատումը և նույնականացումը կարևոր քայլեր են պրոտեոմի վերլուծության մեջ: Գելային էլեկտրոֆորեզից հետո նրանց անհրաժեշտ է սպիտակուցի բարձր լուծաչափի բնութագրում: Գոյություն ունեն ներկման բազմաթիվ մեթոդներ, որոնք ներառում են տարբեր բծեր, ինչպիսիք են անիոնային ներկերը (coomassie brilliant blue), մետաղական կատիոնները (իմիդազոլ-ցինկ), արծաթի ներկերը և լյումինեսցենտային ներկերը և այլն: Երբեմն կարող են օգտագործվել նաև ռադիոակտիվ զոնդեր:Ներկման տեխնիկայի ընտրությունը կախված է լաբորատորիայում պատկերային սարքավորումների պարզությունից, առկայությունից և այլն:
Ի՞նչ է Coomassie Staining-ը:
Coomassie ներկումը սպիտակուցների ներկման տեխնիկա է, որն օգտագործում է coomassie փայլուն կապույտ բիծ: Այն ընդհանուր առմամբ կոչվում է coomassie blue տեխնիկա: Coomassie brilliant blue-ն ամենահայտնի անիոնային սպիտակուցային ներկն է: Այս բիծը սովորաբար ներկում է գրեթե բոլոր սպիտակուցները՝ միջին զգայունության դեպքում լավ քանակական գծայինությամբ: Coomassie փայլուն կապույտ բիծը ոչ հատուկ կերպով կապում է գրեթե բոլոր սպիտակուցներին: Գոյություն ունեն coomassie փայլուն կապույտ ներկերի երկու տարբեր տարբերակներ՝ R-250 և G-250: R-250-ն առաջարկում է ներկման ավելի կարճ ժամանակներ, մինչդեռ G-250-ը հասանելի է ավելի զգայուն և էկոլոգիապես մաքուր ձևակերպումներով:
Նկար 01. Coomassie Staining
Coomassie ներկերը շատ տարածված են զանգվածային սպեկտրոմետրիայի և սպիտակուցների նույնականացման ուսումնասիրություններում: Ավելին, bio-safe coomassie stain-ը coomassie blue G-250-ի ոչ վտանգավոր ձևակերպումն է, որը ներկայումս առկա է շուկայում: Այս ձևակերպման առավելությունն այն է, որ այն պահանջում է միայն ջուր ողողման և գունազերծման համար: Bio-safe coomassie բիծն առաջարկում է զգայունություն, որը համարժեք է սովորական coomassie blue G-250-ին, բայց ավելի լավ, քան coomassie stain R-250-ը: Ավելին, այն ունի ավելի պարզ և արագ ներկման արձանագրություն, քան սովորական Coomassie blue G-250-ը: Coomassie blue ներկման թերությունն այն է, որ այն ավելի քիչ զգայուն է, համեմատած արծաթի ներկման հետ: Coomassie կապույտ ներկումը մոտավորապես 50 անգամ ավելի քիչ զգայուն է, քան արծաթը: Այնուամենայնիվ, կապելու իր պարզության պատճառով այն նախընտրելի է շատ ուսումնասիրություններում:
Ի՞նչ է արծաթի ներկումը:
Արծաթի ներկումը սպիտակուցների ներկման տեխնիկա է, որն օգտագործում է արծաթե բիծ:Արծաթի ներկումն օգտագործվում է ինչպես ագարոզայի, այնպես էլ պոլիակրիլամիդային գելերը ներկելու համար: Ագարոզայի գելերում սպիտակուցի արծաթով ներկումն առաջին անգամ մշակվել է 1973 թվականին Կերենիի և Գալյասի կողմից: Հետագայում այն հարմարեցվեց պոլիակրիլամիդ գելերի սպիտակուցների համար, որոնք օգտագործվում են SDS-PAGE-ում: Ներկայումս արծաթի ներկումն օգտագործվում է նաև ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի ներկման համար։ Գելերը ներկելու համար այս մեթոդով գելերը ինկուբացվում են արծաթի նիտրատի լուծույթով: Արծաթի ներկումը ներկում է այն վայրերը, որտեղ առկա են սպիտակուցներ՝ դարչնագույնից մինչև սև:
Նկար 02. Արծաթի ներկում
Արծաթի ներկման ինտենսիվությունը կախված է սպիտակուցի առաջնային կառուցվածքից: Ավելին, օգտագործվող անոթների մաքրությունը և ռեակտիվների մաքրությունը կարող են ազդել նաև արծաթի ներկման որակի վրա:Այնուամենայնիվ, արծաթի ներկման թերությունն այն է, որ այն ի վիճակի չէ հայտնաբերել բոլոր սպիտակուցները, հատկապես գլիկոպրոտեինները և սպիտակուցները, որոնց կողային շղթաներին կցված են մեծ ձևափոխված խմբեր:
Որո՞նք են նմանությունները Coomassie-ի և Silver Staining-ի միջև:
- Coomassie-ն և արծաթի ներկումը երկու տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են սպիտակուցների ներկման համար:
- Նրանք կարող են ներկել և՛ սպիտակուցները, և՛ ԴՆԹ-ն։
- Երկու ներկման տեխնիկան էլ թերություններ ունեն։
- Այս տեխնիկան ունի նմանատիպ քայլեր, ինչպիսիք են ամրացումը, ներկումը և գունաթափումը:
Ո՞րն է տարբերությունը Coomassie-ի և Silver Staining-ի միջև:
Coomassie ներկումը սպիտակուցի ներկման տեխնիկա է, որն օգտագործում է coomassie փայլուն կապույտ բիծը, մինչդեռ բեկորային ներկումը սպիտակուցի ներկման տեխնիկա է, որն օգտագործում է արծաթե ներկ: Այսպիսով, սա է հիմնական տարբերությունը Coomassie- ի և արծաթի ներկման միջև: Ավելին, Coomassie ներկումը ավելի քիչ զգայուն է, քան արծաթը:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկայում թվարկված են տարբերությունները Coomassie-ի և արծաթի ներկման միջև աղյուսակային տեսքով՝ կողք կողքի համեմատելու համար:
Ամփոփում – Coomassie vs Silver Staining
Սպիտակուցները վիզուալացնելու համար կարող է իրականացվել սպիտակուցին հատուկ ներկեր կապող կամ գունավոր առաջացնող քիմիական ռեակցիա: Սա կոչվում է սպիտակուցային ներկում: Coomassie-ն և արծաթի ներկումը երկու տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են սպիտակուցների ներկման մեջ: Coomassie ներկման տեխնիկան օգտագործում է coomassie փայլուն կապույտ բիծ, մինչդեռ բեկորային ներկման համար օգտագործվում է արծաթե բիծ: Այսպիսով, սա է հիմնական տարբերությունը Coomassie-ի և արծաթի ներկման միջև:
