GFP-ի և EGFP-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ GFP-ն վայրի տիպի սպիտակուց է, որը ներառված է ոչ կաթնասունների բջիջների մոլեկուլային կլոնավորման մեջ, մինչդեռ EGFP-ն բարելավված կամ մշակված GFP տեսակ է, որը կարող է օգտագործվել կաթնասունների բջիջների վրա:.
Մոլեկուլային կլոնավորումը առաջադեմ տեխնիկա է, որը գիտնականները անսահմանորեն օգտագործում են սպիտակուցները ռեկոմբինանտ տեխնոլոգիայի միջոցով արտահայտելու համար: Ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիայի մեջ անհրաժեշտ է ռեկոմբինանտ վեկտորը հաջողությամբ վերածել հյուրընկալող օրգանիզմի: Հետևաբար, փոխակերպման գործընթացում պետք է նույնականացվի և հաստատվի, թե արդյոք հետաքրքրող գենը փոխակերպվել է, թե ոչ հյուրընկալողին: Դա գնահատելու համար մոլեկուլային կենսաբանները մի քանի տեխնիկա են ընդունում։Այդ մեթոդներից մեկը ռեպորտաժի գենն է: Այս ռեպորտաժային գեները գործում են որպես ընտրովի մարկերներ՝ ճիշտ փոխակերպիչներ ընտրելու համար: Այսպիսով, Կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուցը (GFP) և ուժեղացված կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուցը (EGFP) երկու ռեպորտաժային սպիտակուցներ են, որոնք օգտագործվում են մոլեկուլային կլոնավորման մեջ:
Ի՞նչ է GFP-ն:
GFP-ն վայրի տիպի սպիտակուց է, որը պարունակում է 238 ամինաթթուների մնացորդներ և ամինաթթուների հաջորդականությունների մի քանի ընտրովի շրջաններ, որոնք այն տարբերում են լյումինեսցենտային այլ սպիտակուցներից: Ավելին, այս վայրի տիպի սպիտակուցը սկզբնապես մեկուսացված էր Aequorea Victoria-ից; մի տեսակ մեդուզա. Այնուամենայնիվ, բնական երևույթների ժամանակ մեդուզան կարողացավ առաջացնել կանաչ գույնի ֆլյուորեսցենտ՝ ի պատասխան որոշակի գրգռիչների։
Ավելի վաղ այս հայեցակարգը զարմացրել է գիտնականներին, և նրանք որոշել են օգտագործել այն իրենց ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիաների վրա: Հետևաբար, գիտնականներն օգտագործել են վայրի տիպի գենի այս մուտանտ ձևը որպես ռեպորտաժային գեն իրենց գենային արտահայտման ուսումնասիրություններում: GFP-ի վայրի տիպի գենն ի վիճակի է արտադրել սպիտակուց, որը լյումինեսցենտ է հաղորդում սենյակային ջերմաստիճանում կամ ուլտրամանուշակագույն լույսի ներքո:Հետևաբար, փոխակերպիչների մեջ մտցնելով, այն արտահայտում և արտադրում է ֆլյուորեսցենտ: Եթե ֆլյուորեսցենցիան առաջանում է փոխակերպման գործընթացից հետո, դա հաստատում է վերափոխման գործընթացի հաջողությունը: Պարզ խոսքերով, ֆլուորեսցենտային արտանետումը ազդանշան է տալիս այն վեկտորի հաջող փոխակերպումը, որը կրում է հետաքրքրող գենը դեպի հյուրընկալող:
Նկար 01. GFP
Այս պատճառով GFP-ն գործում է որպես գենի արտահայտման in vivo մարկեր: Ներկայումս GFP արտադրելու համար օգտագործվում են գենետիկական ինժեներիայի մեթոդներ: Նաև հասանելի են GFP-ի շատ բարելավված տարբերակներ, ինչպիսին է EGFP-ն: Հետևաբար, սա հնարավորություն է տալիս GFP-ի արդյունավետ օգտագործումը մոլեկուլային կլոնավորման և գեների արտահայտման ուսումնասիրություններում:
Ի՞նչ է EGFP:
Ընդլայնված կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուցը կամ EGFP-ն GFP-ի բարելավված տարբերակն է:Պարզ բառերով, մենք կարող ենք սահմանել EGFP որպես վայրի տիպի GFP-ի ինժեներական տարբերակ: Երբ GFP-ի վայրի տիպի գենը մուտացիայի է ենթարկվում, այն տալիս է օգտակար ազդեցություն: Այսպիսով, GFP-ի մուտացված գենը թույլ է տալիս արտահայտել նոր նիշեր, և դրա արդյունքում մենք կարող ենք արտադրել Ընդլայնված GFP՝ բարելավված բնութագրերով: Ավելին, մենք կարող ենք հաջողությամբ ներմուծել մուտացիաներ վայրի տիպի GFP գենում՝ օգտագործելով ճառագայթման կամ քիմիական մեթոդները: Այս մուտացված գեներն այնուհետև արտադրում են EGFP, որն ունի ավելի օգտակար հատկություններ:
Նկար 02. EGFP
EGFP-ի բարելավված բնութագրերը հետևյալն են.
- Ի վիճակի է արձակել ավելի ուժեղ լյումինեսցենտային ազդանշաններ։
- Ունի բարձր զգայունություն։
- Կարելի է օգտագործել այն կաթնասունների բջիջների վրա՝ պրոկարիոտների և այլ ցածր մակարդակի էուկարիոտների փոխարեն:
- Նաև ապահովում է արտադրանքի մաքրության բարձրացում:
Հետևաբար, GFP-ի համեմատությամբ, EGFP-ն նախընտրելի ընտրությունն է գեների արտահայտման ուսումնասիրությունների համար: Այնուամենայնիվ, ապրանքն ավելի թանկ է GFP-ի համեմատ:
Որո՞նք են նմանությունները GFP-ի և EGFP-ի միջև:
- GFP-ն և EGFP-ն երկու սպիտակուցներ են, որոնք ունեն կանաչ գույն արձակելու հատկություն
- Հետևաբար, երկուսն էլ գործում են որպես ռեպորտաժային սպիտակուցներ գեների արտահայտման ուսումնասիրություններում:
- Նաև, հնարավոր է երկուսն էլ սինթեզել՝ օգտագործելով ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիա։
- Ավելին, հեշտ է հետագա մուտացիայի ենթարկել այս երկու տեսակները՝ բարելավված ձևերը սինթեզելու համար:
Ո՞րն է տարբերությունը GFP-ի և EGFP-ի միջև:
Լրագրող գենը գեն է, որը կցվում է ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիայի մեջ հետաքրքրող գենին: Այն ազդարարում է ռեկոմբինանտ վեկտորի հաջող փոխակերպումը հյուրընկալողին:Այստեղ GFP-ն և EGFP-ն կանաչ ֆլորեսցենտային սպիտակուցների երկու տեսակ են, որոնք աշխատում են որպես թղթակից սպիտակուցներ: Այնուամենայնիվ, GFP-ի և EGFP-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ GFP-ն վայրի տիպ է, մինչդեռ EGFP-ն GFP-ի ինժեներական տարբերակ է: Ավելին, EGFP-ն ունի ավելի շահավետ բնութագրեր, քան GFP-ն: Օրինակ, EGFP-ն արտադրում է ավելի ուժեղ լյումինեսցենտ լույս և ավելի զգայուն է, քան GFP-ն: GFP-ի և EGFP-ի միջև մեկ այլ տարբերություն այն համակարգերն են, որոնցում մենք կարող ենք օգտագործել դրանք: Ոչ կաթնասուն համակարգերը օգտագործում են GFP, մինչդեռ կաթնասունների համակարգերը օգտագործում են EGFP:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ներկայացնում է GFP-ի և EGFP-ի միջև տարբերությունը աղյուսակային տեսքով:
Ամփոփում – GFP vs EGFP
GFP-ն և EGFP-ն ռեպորտաժային սպիտակուցներ են մոլեկուլային կլոնավորման և գեների արտահայտման ուսումնասիրություններում: GFP-ն վայրի տիպի սպիտակուց է, որը կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուց է:Սպիտակուցը սկզբում առանձնացված էր Aequorea victoria մեդուզայից: Ի հակադրություն, EFGP-ն GFP սպիտակուցի ուժեղացված ձև է: Դա վայրի տիպի մուտանտ է՝ բարելավված բնութագրերով։ Հետևաբար, EFGP-ն ունի ավելի բարձր ազդանշանային ուժ և ավելի բարձր զգայունություն: Հետեւաբար, մենք կարող ենք այն օգտագործել կաթնասունների վեկտորների վրա: Ի հակադրություն, GFP-ի օգտագործումը հիմնականում միայն ոչ կաթնասունների վեկտորների վրա է: Ընդհանուր առմամբ, սա է տարբերությունը GFP-ի և EGFP-ի միջև:
