Հիմնական տարբերություն – SDS էջ ընդդեմ Western Blot
Western blotting-ը տեխնիկա է, որը հայտնաբերում է հատուկ սպիտակուցը սպիտակուցի նմուշից: Այս տեխնիկան իրականացվում է մի քանի հիմնական քայլերի միջոցով՝ գելային էլեկտրոֆորեզ, բլոտավորում և հիբրիդացում: Նատրիումի դոդեցիլ սուլֆատ պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզը (SDS Page) գելային էլեկտրոֆորեզի մի տեսակ տեխնիկա է, որն օգտագործվում է սպիտակուցները բաժանելու համար՝ ըստ դրանց չափերի (մոլեկուլային քաշի): Western blot-ը բլոտող մեմբրանի հատուկ թերթիկ է, որն օգտագործվում է SDS էջում սպիտակուցների նույն ձևը փոխանցելու համար: SDS Page-ի և western blot-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ SDS Page-ը թույլ է տալիս սպիտակուցների բաժանումը խառնուրդում, մինչդեռ western blot-ը թույլ է տալիս հայտնաբերել և քանակականացնել որոշակի սպիտակուցը խառնուրդից:Երկուսն էլ օգտակար են սպիտակուցի վերլուծության ուսումնասիրություններում:
Ի՞նչ է SDS էջը:
SDS Page-ը գելային էլեկտրոֆորեզի տեխնիկա է, որն օգտագործվում է սպիտակուցների տարանջատման համար: Այն սովորաբար օգտագործվում է կենսաքիմիայի, գենետիկայի, դատաբժշկական և մոլեկուլային կենսաբանության մեջ: Երբ սպիտակուցները արդյունահանվում են նմուշից, դրանք գործարկվում են SDS-ից և պոլիակրիլամիդից կազմված գելի վրա: SDS-ը անիոնային լվացող միջոց է, որն օգտագործվում է սպիտակուցների գծայինացման համար (դենատուրային սպիտակուցներ) և գծային սպիտակուցներին բացասական լիցք հաղորդելու համար, որը համաչափ է նրանց մոլեկուլային զանգվածին: Պոլիակրիլամիդը դառնում է գելի ամուր հենարան: Դենատուրացված սպիտակուցները, որոնք բացասաբար լիցքավորված են, գաղթում են դեպի ապարատի դրական ծայրը գելի միջով: Ըստ սպիտակուցների չափերի՝ միգրացիայի արագությունը տարբերվում է սպիտակուցների միջև և տեղի է ունենում տարանջատում։ Հետևաբար, SDS էջը օգտակար է առանձին սպիտակուցների բաժանման համար՝ ելնելով դրանց չափերից:
Պոլիակրիլամիդային գելի պատրաստումը սպիտակուցների մասնատման համար կարևոր քայլ է SDS էջում:Պոլիակրիլամիդի ճիշտ կոնցենտրացիան և օգտագործվող խաչաձեւ կապող նյութի տեսակը խիստ ազդում են գելի ֆիզիկական հատկությունների վրա, ինչը հանգեցնում է տարբեր սպիտակուցների իրական տարանջատմանը: Գելի ծակոտիների չափերը պետք է պատշաճ կերպով կառավարվեն արդյունավետ տարանջատման համար: Այնուամենայնիվ, SDS Page-ը համարվում է սպիտակուցների առանձնացման բարձր լուծաչափի տեխնիկա:
SDS Page տեխնիկան ունի հիմնական սահմանափակում սպիտակուցների վերլուծության մեջ: Քանի որ SDS-ը դենատուրացնում է սպիտակուցները մինչև տարանջատումը, այն թույլ չի տալիս հայտնաբերել ֆերմենտային ակտիվությունը, սպիտակուցների կապակցման փոխազդեցությունները, սպիտակուցային կոֆակտորները և այլն:
Նկար 01. SDS էջ
Ի՞նչ է Western Blot-ը:
Western blotting տեխնիկան հնարավորություն է տալիս սպիտակուցային խառնուրդից հայտնաբերել հատուկ սպիտակուց և չափել սպիտակուցի քանակն ու մոլեկուլային քաշը:Western blot-ը այն թաղանթն է, որն օգտագործվում է բլոտավորման գործընթացում SDS-պոլիակրիլամիդ գելի սպիտակուցի նախշերի հայելային պատկերը ստանալու համար: Վեսթերն բլոտինգի համար օգտագործվող թաղանթը հիմնականում կազմված է նիտրոցելյուլոզից կամ պոլիվինիլիդեն դիֆտորիդից (PVDF): Փոխանցված սպիտակուցով թաղանթը կարող է օգտագործվել ցանկալի սպիտակուցը նույնականացնելու համար: Այն պահանջում է բարձրորակ հակամարմին հիբրիդացման միջոցով ցանկալի սպիտակուցի հայտնաբերման համար: Հակամարմինը կապվում է իր հատուկ հակագենին և բացահայտում է ցանկալի հակագենի առկայությունը, որը սպիտակուց է։
ՍԴՍ պոլիակրիլամիդ գելից սպիտակուցների տեղափոխումը western blot կատարվում է էլեկտրաբլոտինգով: Սա արդյունավետ և արագ մեթոդ է, որը ստիպում է սպիտակուցներին էլեկտրոֆորացնել գելից և անցնել նիտրոցելյուլոզային թաղանթի վրա (Western blot):
Նկար 02. Western Blot
Ո՞րն է տարբերությունը SDS էջի և Western Blot-ի միջև:
SDS էջ ընդդեմ Western Blot |
|
| SDS էջը գելային էլեկտրոֆորեզի տեխնիկա է: | Western blot-ը տեխնիկա է, որն իրականացվում է թաղանթի վրա՝ խառնուրդից հատուկ սպիտակուց հայտնաբերելու համար: |
| Օգտագործել | |
| SDS էջը թույլ է տալիս առանձնացնել սպիտակուցները՝ ըստ դրանց չափերի։ | Western blot-ը թույլ է տալիս սպիտակուցներ փոխանցել SDS էջի գելին՝ առանց դրա օրինաչափությունը փոխելու և թույլ է տալիս հիբրիդացում հատուկ հակամարմիններով: |
| Թերություններ | |
| Սպիտակուցների դենատուրացիա, բարձր արժեքը և նեյրոտոքսինի քիմիական նյութերի առկայությունը այս տեխնիկայի թերություններն են: | Այս տեխնիկան ժամանակատար է և պահանջում է լավ փորձառու անձնական և հատուկ վերահսկվող պայմաններ: |
Ամփոփում – SDS էջ ընդդեմ Western Blot
SDS էջը և western blot-ը սպիտակուցի վերլուծության մեջ ներգրավված երկու մեթոդներ են: SDS Page-ը թույլ է տալիս հեշտորեն բաժանել սպիտակուցները գելի վրա՝ ըստ դրանց մոլեկուլային քաշի: Western blot-ը օգնում է հաստատել կոնկրետ սպիտակուցի առկայությունը և քանակը՝ հատուկ հակամարմինների հետ հիբրիդացման միջոցով: Սա է տարբերությունը SDS էջի և western blot-ի միջև:
