Հիմնական տարբերություն – SDS էջ ընդդեմ բնիկ էջի
SDS-ը և հայրենի էջը մոլեկուլային կենսաբանության մեջ օգտագործվող պոլիակրիլամիդային գելային էլեկտրոֆորեզի երկու տեսակի տեխնիկա են: SDS Page-ի և Native Page-ի հիմնական տարբերությունը օգտագործվող պոլիակրիլամիդ գելի տեսակն է: SDS Page-ում օգտագործվում է դենատուրացնող գել, հետևաբար, մոլեկուլները բաժանվում են՝ ելնելով դրանց մոլեկուլային քաշից: Ի հակադրություն, Native Page-ում օգտագործվում են չդենատուրացնող գելեր։ Հետևաբար, մոլեկուլները բաժանվում են՝ ելնելով դրանց չափից, լիցքից և ձևից:
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (էջ) օգտագործում է գել, որը ստացվում է ակրիլամիդի մոնոմերների պոլիմերացման միջոցով մեթիլեն բիսակրիլամիդով:Պոլիակրիլամիդն ավելի կոշտ է և ջերմակայուն, քան ագարոզը: Պոլիակրիլամիդային գելերն ունեն ծակոտիների ավելի փոքր չափ, որը թույլ է տալիս արդյունավետորեն բաժանել սպիտակուցները: Էջի կարգավորումների երկու հիմնական տեսակ կա՝ SDS Page և Native Page: SDS Page կամ նատրիում-դոդեցիլ սուլֆատ պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզը բաժանում է սպիտակուցները՝ հիմնվելով դրանց մոլեկուլային քաշի վրա: Denaturing gels օգտագործվում են SDS Page-ում: Native Page-ն օգտագործում է չդենատուրացնող գելեր և առանձնացնում է սպիտակուցները՝ ելնելով դրանց չափից, լիցքից և ձևից (3D ձևավորում):
Ի՞նչ է SDS էջը:
SDS էջը ամենատարածված էլեկտրոֆորետիկ տեխնիկան է, որն օգտագործվում է սպիտակուցների մոլեկուլային քաշի հիման վրա առանձնացնելու համար: Գելը պատրաստվում է SDS (Sodium dodecyl sulfate) ավելացմամբ, որը լվացող միջոց է։ SDS-ը պրոտեինները վերածում է մոնոմերների: SDS-ը անիոնային լվացող միջոց է: Հետևաբար, այն ավելացնում է զուտ բացասական լիցք սպիտակուցներին pH լայն տիրույթում: Երբ զուտ բացասական լիցքը փոխանցվում է սպիտակուցի մոլեկուլներին, լիցքի փոփոխության պատճառով բարդ կառուցվածքները քայքայվում են:Բացասական լիցքի պատճառով սպիտակուցները ձգվում են դեպի դրական վերջ։ Այսպիսով, ավելի ցածր մոլեկուլային քաշ ունեցող մոլեկուլները ավելի արագ են շարժվում գելային մատրիցով և կարող են դիտվել անոդին մոտ, մինչդեռ բարձր մոլեկուլային քաշով սպիտակուցները դիտվում են ավելի մոտ հորատանցքերին:
Նկար 01. SDS էջ
Պոլիպեպտիդային շղթային կապող SDS-ը համաչափ է նրա հարաբերական մոլեկուլային զանգվածին: Հետևաբար, մոլեկուլային զանգվածը կարող է որոշվել նաև SDS Page-ի միջոցով: SDS Page գելերի ներկումը կատարվում է բրոմֆենոլ կապույտ ներկման միջոցով: SDS-ի էջերի կիրառությունները ավելի մեծ տարածում ունեն, որտեղ այն կարող է օգտագործվել հարաբերական մոլեկուլային զանգվածը գնահատելու և սպիտակուցային խառնուրդում սպիտակուցների հարաբերական առատությունը որոշելու համար: SDS Page-ը կարող է օգտագործվել նաև սպիտակուցների բաշխումը սպիտակուցների խառնուրդում որոշելու համար:SDS էջը կիրառվում է նաև սպիտակուցները մաքրելու և գնահատելու համար: Այն օգտագործվում է որպես նախնական պրոցեդուրա Western blotting-ի և հիբրիդացման համար, որն իր հերթին օգտագործվում է սպիտակուցների քարտեզագրման և նույնականացման համար:
Ի՞նչ է բնիկ էջը:
Հիմնական պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզում (Native Page) օգտագործվում է չդենատուրացնող գել: Հետևաբար, SDS-ը կամ որևէ այլ դենատորացնող նյութ չի ավելացվում գելային մատրիցին: Native Page-ում սպիտակուցների բաժանումը հիմնված է սպիտակուցի լիցքի և չափի վրա: Հետևաբար, սպիտակուցի շարժունակությունը կախված է սպիտակուցի լիցքից և չափից:
Սպիտակուցի լիցքը կախված է ամինաթթուների կողային շղթաներից: Եթե կողային շղթաները բացասական լիցքավորված են, ապա սպիտակուցը կստանա ընդհանուր բացասական լիցք և հակառակը: Սպիտակուցները պահպանում են 3D կոնֆորմացիան՝ տեղի ունեցող ծալման պատճառով: Ծալումը առաջանում է սպիտակուցների մի քանի տեսակի կապերից, ինչպիսիք են դիսուլֆիդային կապերը, հիդրոֆոբ փոխազդեցությունները և ջրածնային կապերը:Հետևաբար, եթե բնիկ Էջը տեղափոխվում է չեզոք pH-ով, ապա սպիտակուցները կբաժանվեն ըստ սպիտակուցի մոլեկուլային ձևի: Հետևաբար, Native Page-ը կարող է օգտագործվել որպես զգայուն տեխնիկա՝ հայտնաբերելու սպիտակուցի լիցքի կամ կառուցվածքի փոփոխությունը:
Native Page-ի հիմնական առավելությունն այն է, որ Էջի վերլուծության համար օգտագործվող սպիտակուցը էջի վերլուծությունից հետո կարող է վերականգնվել իր սկզբնական վիճակում, քանի որ պրոցեսի ընթացքում սպիտակուցը չի խախտվում: Native Page-ը համեմատաբար բարձր թողունակության տեխնիկա է, և սպիտակուցի կայունությունը մեծանում է:
Նկար 02. Մայրենի Էջ
Գելի գործարկման ավարտից հետո Native Page գելը կարելի է դիտել՝ ներկելով բրոմֆենոլ կապույտով կամ որևէ այլ հարմար ներկող ռեագենտով: Native Page-ի կիրառումը ներառում է թթվային սպիտակուցների առանձնացում, ներառյալ գլիկոպրոտեինները, ինչպիսիք են մարդկային ռեկոմբինանտ էրիթրոպոետինը կամ եղջերավոր շիճուկի ալբումինում (BSA) առկա սպիտակուցների նույնականացումը:
Որո՞նք են նմանությունները SDS էջի և բնիկ էջի միջև:
- Եվ SDS Page, և Native Page համակարգերն օգտագործում են պոլիակրիլամիդ գելը որպես գելի մատրիցա:
- Երկուսն էլ օգտագործվում են սպիտակուցների առանձնացման և նույնականացման համար:
- Երկուսն էլ օգտագործում են էլեկտրոֆորետիկ շարժունակություն՝ միացությունները բաժանելու համար։
- Երկուսն էլ կարող են կատարվել ուղղահայաց կամ հորիզոնական ձևով (հիմնականում արվում են որպես ուղղահայաց էջի կարգավորումներ, քանի որ գործարկման երկարությունը ավելի շատ է):
- Էլեկտրոֆորեզի ապարատը, ներառյալ գելի բաքը, սանրերը, էլեկտրամատակարարումը անհրաժեշտ է երկու տեխնիկայի աշխատանքի համար:
- Գելի վիզուալացումը կարող է իրականացվել երկու տեխնիկայի ներկման մեթոդներով:
Ո՞րն է տարբերությունը SDS էջի և բնիկ էջի միջև:
SDS էջ ընդդեմ բնիկ էջի |
|
| SDS Page կամ նատրիում-դոդեցիլ սուլֆատ էջը առանձնացնում է սպիտակուցները՝ ելնելով դրանց մոլեկուլային քաշից, և այն օգտագործում է դենատուրացնող գել: | Native Page օգտագործում է չդենատուրացնող գելեր և բաժանում է սպիտակուցները՝ ելնելով դրանց չափից, լիցքից և ձևից (3D ձևավորում): |
| Գելի տեսակ | |
| Դենատուրացնող գել օգտագործվում է SDS-էջում: | Բնական էջում օգտագործվում է ոչ դենատուրացնող գել: |
| SDS-ի ներկայություն | |
| SDS-ն առկա է որպես լվացող միջոց՝ SDS էջում նմուշի վրա բացասական լիցք հաղորդելու համար: | SDS-ը չկա մայրենի էջում: |
| Բաժանման հիմք | |
| Սպիտակուցների տարանջատումը կախված է SDS էջի սպիտակուցի մոլեկուլային քաշից: | Բաժանումը կախված է մայրենի էջի սպիտակուցի մոլեկուլի չափից և ձևից: |
| Սպիտակուցի կայունություն | |
| Սպիտակուցի կայունությունը ցածր է SDS էջում: | Սպիտակուցի կայունությունը բարձր է մայրենի էջում: |
| Բնօրինակ սպիտակուցի վերականգնում | |
| Հնարավոր չէ, քանի որ այն այլասերված է SDS էջում: | Հնարավոր է մայրենի էջում։ |
Ամփոփում – SDS էջ ընդդեմ հայրենի էջի
SDS Page-ը և Native Page-ը պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի երկու տեսակ են, որոնք օգտագործվում են սպիտակուցները առանձնացնելու համար: SDS էջը մշակվում է SDS կոչվող լվացող միջոցով: SDS-ն ընդհանուր բացասական լիցք է հաղորդում սպիտակուցին, որն այնուհետև հանգեցնում է սպիտակուցի դենատուրացիայի:Հետեւաբար, սպիտակուցները բաժանվում են՝ ելնելով դրանց մոլեկուլային քաշից: Ի հակադրություն, Native Page տեխնիկան չի օգտագործում ոչ մի այլանդակող նյութ: Այսպիսով, սպիտակուցները կամ բաժանվում են՝ ելնելով դրանց չափից կամ ձևից: Սա է տարբերությունը SDS էջի և հայրենի էջի միջև:
