Սաքարոզայի գրադիենտի և սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացման հիմնական տարբերությունն այն է, որ սախարոզայի գրադիենտային ուլտրակենտրոնացման ժամանակ օգտագործվում է շարունակական սախարոզային գրադիենտ, մինչդեռ սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացման ժամանակ օգտագործվում է անդադար սախարոզային գրադիենտ::
Սաքարոզի գրադիենտը և սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացումը երկու նմանատիպ տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են մակրոմոլեկուլների հատուկ տեսակների առանձնացման համար: Երկու տեխնիկայում էլ օգտագործվում է սախարոզայի խտության գրադիենտ: Բայց սախարոզայի գրադիենտային ուլտրակենտրոնացման ժամանակ օգտագործվում է շարունակական խտության գրադիենտ, մինչդեռ սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման ժամանակ օգտագործվում է անդադար խտության գրադիենտ:
Ի՞նչ է սախարոզային գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը:
Սաքարոզի գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը տեխնիկա է, որը կարող է օգտագործվել մակրոմոլեկուլների մասնատման համար, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները: Այս տեխնիկայում կան մի քանի քայլեր. Դրանք են՝ սախարոզայի գրադիենտ պատրաստումը, ցենտրիֆուգումը, տարանջատումը և էլյուցիան։ Գրադիենտի պատրաստումը այս տեխնիկայի հիմնական քայլն է: Այս տեխնիկայում տարբեր չափերի մակրոմոլեկուլներ պարունակող նմուշը շերտավորվում է սախարոզայի գրադիենտ սյունակի մակերեսին: Ցենտրիֆուգավորման ժամանակ տարբեր չափերի մակրոմոլեկուլները նստում են սախարոզայի գրադիենտ սյունակի միջով տարբեր արագությամբ: Նստվածքը կախված է մի քանի գործոններից, ներառյալ ցենտրիֆուգման ուժը, չափի ձևը և մակրոմոլեկուլների խտությունը, գրադիենտի խտությունը և մածուցիկությունը: Ցենտրիֆուգացիայի վերջում մակրոմոլեկուլները տարածականորեն բաժանվում են ըստ խտության: Ավելի մեծ մակրոմոլեկուլներ (բարձր խտության մակրոմոլեկուլներ) նստում են դեպի հատակը։ Ավելի թեթևները (ցածր խտության մակրոմոլեկուլները) մնում են գրադիենտի վերևում։Հետեւաբար, մոլեկուլները բաժանվում են որպես տարբեր շերտեր: Այնուհետև շերտերը պետք է առանձնացվեն, և պետք է կատարվի հատուկ մակրոմոլեկուլի մաքրում սախարոզից:
Նկար 01. սախարոզայի գրադիենտ ուլտրակենտրոնացում
Կիրառման մասով այս մեթոդը լայնորեն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի մոլեկուլների մասնատման համար: Սախարոզային գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը սովորաբար օգտագործվում է սպիտակուցային համալիրի չափը և կազմը բնութագրելու համար: Ավելին, այս տեխնիկան օգտագործվում է mRNA-ի մասնակի մաքրման համար։
Ի՞նչ է Sucrose Cushion Ultracentrifugation-ը:
Սաքարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացումը ևս մեկ տեխնիկա է, որը հնարավորություն է տալիս մակրոմոլեկուլների մասնատումը: Ի տարբերություն սախարոզայի խտության գրադիենտ ուլտրակենտրոնացման, սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման համար օգտագործվում է անդադար խտության գրադիենտ:Սախարոզայի կոնցենտրացիան բարձրանում է վերևից ներքև առանձին քայլերով: Այս տեխնիկայում տարանջատումը ձեռք է բերվում պարզած էքստրակտը ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ, այսպես կոչված, սախարոզայի բարձի մեջ փոքր ծավալի սախարոզայի լուծույթի վրա դնելով: Սա թույլ է տալիս ավելի լավ տարանջատում բարձր արագությամբ ցենտրիֆուգացման ժամանակ: Երբ մոլեկուլները բաժանվում են որպես շերտ սախարոզայի բարձի միջև, սպիտակ ժապավենը կարող է հավաքվել և մաքրվել: Ավելին, կեղտերը կարելի է հետագայում հեռացնել՝ օգտագործելով սախարոզա բարձի մեթոդը: Սախարոզայի բարձի մեթոդը թույլ է տալիս խողովակի 60-70%-ը լցնել նմուշով: Հետևաբար, սախարոզայի բարձի մեթոդը հնարավորություն է տալիս ավելի մեծ ծավալի նմուշ մշակել:
Որո՞նք են նմանությունները սախարոզայի գրադիենտի և սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման միջև:
- Սաքարոզայի գրադիենտը և սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացումը երկու տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են մակրոմոլեկուլների խառնուրդն առանձնացնելու համար:
- Երկու մեթոդներում էլ օգտագործվում է սախարոզայի գրադիենտ:
- Ցենտրիֆուգումը քայլ է երկու մեթոդների մեջ:
- Մոլեկուլները նստում են որպես գոտի կամ գոտի յուրաքանչյուր մեթոդում:
Ո՞րն է տարբերությունը սախարոզայի գրադիենտի և սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման միջև:
Սաքարոզային գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը տեխնիկա է, որն օգտագործում է շարունակական սախարոզային գրադիենտ ցենտրիֆուգային խողովակում, մինչդեռ սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացումը տեխնիկա է, որն օգտագործում է անդադար սախարոզայի գրադիենտ: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է սախարոզայի գրադիենտի և սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացման միջև:
Ավելին, սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացումը թույլ է տալիս մշակել նմուշի ավելի մեծ ծավալ, մինչդեռ սախարոզային գրադիենտ ուլտրակենտրոնացումը թույլ է տալիս մշակել նմուշի համեմատաբար ցածր ծավալ:
Ստորև ինֆոգրաֆիկայում ներկայացված են ավելի շատ տարբերություններ սախարոզայի գրադիենտի և սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման միջև:
Ամփոփում – Sucrose Gradient vs Sucrose Cushion Ultracentrifugation
Սաքարոզի գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը բաժանում է մակրոմոլեկուլները՝ օգտագործելով շարունակական սախարոզային գրադիենտ: Ի հակադրություն, սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացումը օգտագործում է անդադար սախարոզայի գրադիենտ՝ խառնուրդի մեջ մասնիկները առանձնացնելու համար: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է սախարոզայի գրադիենտի և սախարոզայի բարձի ուլտրակենտրոնացման միջև: Սախարոզայի բարձի մեթոդը թույլ է տալիս հավաքել մորֆոլոգիապես անձեռնմխելի մասնիկներ, քանի որ այն չի առաջացնում մեխանիկական սթրես, ի տարբերություն սախարոզայի գրադիենտային ուլտրակենտրոնացման, որը մանրացնում է մոլեկուլները դեպի խողովակի հատակը: Ավելին, սախարոզային բարձի ուլտրակենտրոնացումը թույլ է տալիս մշակել նմուշի ավելի մեծ ծավալ, քան սախարոզային գրադիենտային ուլտրակենտրոնացումը:
