Հիմնական տարբերություն – RNASE A ընդդեմ RNASE H
Ռիբոնուկլեազները նուկլեազներ են, որոնք հատուկ քայքայում են ՌՆԹ-ն ավելի փոքր միավորների: Դրանք կարելի է բաժանել երկու կատեգորիայի. էնդորիբոնուկլեազներ և էկզորիբոնուկլեազներ: Էնդորիբոնուկլեազը էնդոնուկլեազ է, որը կարող է քայքայել միաշղթա կամ երկշղթա ՌՆԹ: Այն խզում է ֆոսֆոդիստերային կապերը ՌՆԹ պոլինուկլեոտիդային շղթայի մեջ: Օրինակներն են՝ RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P և RNase H: Exoribonuclease-ն էկզոնուկլեազ է, որը քայքայում է ՌՆԹ-ը՝ հեռացնելով վերջնական նուկլեոտիդները ՌՆԹ-ի մոլեկուլի 5-ից կամ 3-ից: Օրինակներն են՝ RNase R, RNase II, RNase D և RNase PH:RNASE A-ի և RNASE H-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ RNase A-ն ենթաստամոքսային գեղձի ռիբոնուկլեազ է, որը հատուկ քայքայում է միաշղթա ՌՆԹ-ն ավելի փոքր բաղադրիչների, մինչդեռ RNase H-ը ոչ սպեցիֆիկ ֆերմենտ է, որը ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում բաժանում է ավելի փոքր միավորների միջոցով: հիդրոլիտիկ մեխանիզմ։
Ի՞նչ է RNASE A?
RNase A-ն ենթաստամոքսային գեղձի ռիբոնուկլեազ է, որը հատուկ ճեղքում է չզուգակցված ցիտոսինի և ուրացիլի մնացորդները միաշղթա ՌՆԹ-ի 3' վերջում: RNase H-ն աշխատում է աղի ավելի բարձր կոնցենտրացիայի դեպքում (0.3M կամ ավելի բարձր NaCl կոնցենտրացիան): Հիդրոլիտիկ ռեակցիան երկու քայլ է. Այն ձևավորում է 3' ֆոսֆորիլացված արտադրանք 2', 3' ցիկլային մոնոֆոսֆատ միջանկյալ նյութի միջոցով: Թեև այն հատուկ է միաշղթա ՌՆԹ-ին աղի ավելի բարձր կոնցենտրացիայի դեպքում, այն կարող է նաև քայքայել երկշղթա ՌՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում NaCl-ի ավելի ցածր կոնցենտրացիայի դեպքում (0,3M NaCl-ից ցածր)::
Բրյուս Մերրիֆիլդն առաջին անգամ սինթեզեց այս ֆերմենտը: RNase A-ն շատ տարածված ֆերմենտ է մոլեկուլային հետազոտություններում:Տավարի ենթաստամոքսային գեղձի RNase A-ն RNase A-ի օրինակ է: Եվ այն ամենակարծր ֆերմենտներից մեկն է, որն օգտագործվում է լաբորատորիայում: Այս ֆերմենտը իր գործունեության համար կոֆակտորի կարիք չունի։ Այն բարձր ջերմակայուն ֆերմենտ է։ RNase A-ն առաջին ֆերմենտն է և երրորդ սպիտակուցը, որի նկատմամբ հայտնաբերվել է ամինաթթուների ճիշտ հաջորդականություն: Այս ֆերմենտը շատ փոքր է՝ 124 ամինաթթուներով և 12600դա մոլեկուլային զանգվածով: Եվ այն ունի չորս հիստիդինի մնացորդներ (His 12 և His 119, որոնք ներառում են կատալիտիկ ռեակցիա):
Նկար 01. RNase A
RNase A-ն կարող է մեկուսացվել՝ հում նմուշը եռացնելով: Երբ եռում է, մյուս բոլոր ֆերմենտները քայքայում են մնացած RNase A-ն: RNase A-ն զարմանալի կայուն ֆերմենտ է: Այս ֆերմենտը արգելակում է ռիբոնուկլեազի ինհիբիտոր սպիտակուցի, ծանր մետաղների և ուրիդին վանադատի բարդույթներով:
Ի՞նչ է RNase H?
RNase H-ը ոչ սպեցիֆիկ ռիբոնուկլեազային ֆերմենտ է, որը կարող է քայքայել ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում՝ հիդրոլիտիկ ռեակցիայի միջոցով: RNase H-ը կտրում է ՌՆԹ-ի 3'- O-P կապը ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում: Ի վերջո, այն արտադրում է 3'OH և 5' ֆոսֆատ պարունակող արտադրանք: ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ այն առանցքային դեր է խաղում՝ հեռացնելով ՌՆԹ այբբենարանը ԴՆԹ-ի նոր շղթաների ձևավորումից հետո: Լաբորատոր պայմաններում այն հատուկ քայքայում է ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում, բայց ոչ ԴՆԹ-ն և չհիբրիդացված ՌՆԹ-ում: Եվ այս ֆերմենտը սովորաբար օգտագործվում է ՌՆԹ-ի ձևանմուշը ոչնչացնելու համար cDNA-ի սինթեզի ընթացքում առաջին կոմպլեմենտար ԴՆԹ շղթայի ձևավորումից հետո:
Նկար 02. RNase H
RNase H-ն օգտագործվում է նաև նուկլեազային պաշտպանության փորձարկումներում: Այն կարող է ներառվել նաև mRNA-ից պոլի Ա պոչը հեռացնելու մեջ: RNase H-ն ունի բջջի ներսում և դրսում չկոդավորող ՌՆԹ-ն ոչնչացնելու հատկություն:Մետաղական իոնները պահանջվում են որպես կոֆակտորներ այս սպիտակուցային գործունեության համար: Քելատորը (EDTA) կարող է օգտագործվել RNase H ֆերմենտը արգելակելու համար:
Որո՞նք են նմանությունները RNASE A-ի և RNASE H-ի միջև:
- Երկուսն էլ իրենց բնույթով սպիտակուցներ են։
- Երկուսն էլ էնդորիբոնուկլեազ են
- Երկուսն էլ կարող են քայքայել ՌՆԹ-ն։
- Երկուսն էլ կատարում են հիդրոլիտիկ ռեակցիաներ։
- Մոլեկուլային լաբորատորիաներն օգտագործում են այս երկուսն էլ:
Ո՞րն է տարբերությունը RNASE A-ի և RNASE H-ի միջև:
RNASE A ընդդեմ RNASE H |
|
| RNase A-ն ենթաստամոքսային գեղձի ռիբոնուկլեազ է, որը հատուկ ճեղքում է միաշղթա ՌՆԹ-ի չզուգակցված ցիտոսինի և ուրացիլային մնացորդների 3' ծայրը աղի ավելի բարձր կոնցենտրացիայի դեպքում: | RNase H-ը ոչ սպեցիֆիկ ռիբոնուկլեազային ֆերմենտ է, որը կարող է քայքայել ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում՝ հիդրոլիտիկ ռեակցիայի միջոցով: |
| ՌՆԹ-ի տրոհման բնույթ | |
| RNase A-ն հատուկ ճեղքում է միաշղթա ՌՆԹ-ն աղի ավելի բարձր կոնցենտրացիայի դեպքում: | RNase H-ը կտրում է ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում: |
| Գործունեության համար համագործոնների անհրաժեշտություն | |
| RNase A-ն իր ակտիվության համար կոֆակտորների կարիք չունի: | RNase H-ին անհրաժեշտ են մետաղական իոններ որպես կոֆակտորներ իր գործունեության համար: |
| Սպիտակուցային ակտիվության արգելակիչներ | |
| Ռիբոնուկլեազի ինհիբիտոր սպիտակուցը, ծանր մետաղը և ուրիդին վանադատ կոմպլեքսները արգելակում են RNAse A-ի ակտիվությունը: | Քելատորը (EDTA) արգելակում է RNase H-ի ակտիվությունը: |
| ՌՆԹ այբբենարանի հեռացում ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ | |
| RNase A-ն չի օգտագործվում ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ ՌՆԹ պրայմերների հեռացման համար: | RNase H-ն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ ՌՆԹ այբբենարանի հեռացման համար |
| ԴՆԹ կաղապարի հեռացում կոմպլեմենտար ԴՆԹ (C-DNA) սինթեզում | |
| RNase A-ն չի օգտագործվում ՌՆԹ կաղապարի հեռացման համար՝ կոմպլեմենտար ԴՆԹ (C-DNA) սինթեզի ժամանակ: | RNase H-ն օգտագործվում է ՌՆԹ կաղապարի հեռացման համար՝ կոմպլեմենտար ԴՆԹ (C-DNA) սինթեզի ժամանակ: |
| Պոլի-Ա-պոչի հեռացում mRNA-ում հիբրիդացված օլիգոյի հետ (dt) | |
| RNase A-ն չի օգտագործվում օլիգոյի հետ հիբրիդացված mRNA-ում «poly-A պոչը» հեռացնելու համար (dt): | RNase H օգտագործվում է «poly-A պոչը» հեռացնելու համար mRNA-ում հիբրիդացված օլիգո (dt) |
Ամփոփում – RNASE A ընդդեմ RNASE H
Ռիբոնուկլեազները նուկլեազային ֆերմենտներ են, որոնք ունեն ՌՆԹ-ն ավելի փոքր միավորների բաժանելու հատկություն: Դրանք երկու տեսակի են. էնդորիբոնուկլեազներ և էկզորիբոնուկլեազներ: Էնդորիբոնուկլեազը էնդոնուկլեազ է, որն ունի միաշղթա կամ երկշղթա ՌՆԹ քայքայելու հատկություն: Եվ դա կտրում է ֆոսֆոդիստերային կապը ՌՆԹ պոլինուկլեոտիդային շղթայի մեջ: RNase A-ն և RNase H-ը երկու էնդորիբոնուկլեազներ են: RNase A-ն ենթաստամոքսային գեղձի ռիբոնուկլեազ է, որը հատուկ ճեղքում է չզուգակցված ցիտոսինի և ուրացիլային մնացորդները միաշղթա ՌՆԹ-ի 3' ծայրում՝ աղի ավելի բարձր կոնցենտրացիայի դեպքում: RNase H-ը ոչ սպեցիֆիկ ռիբոնուկլեազային ֆերմենտ է, որը կարող է քայքայել ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ԴՆԹ հիբրիդում՝ հիդրոլիտիկ ռեակցիայի միջոցով: Սա է տարբերությունը RNase A-ի և RNase H-ի միջև:
Ներբեռնեք PDF RNASE A ընդդեմ RNASE H
Դուք կարող եք ներբեռնել այս հոդվածի PDF տարբերակը և օգտագործել այն անցանց նպատակներով՝ ըստ մեջբերումների: Խնդրում ենք ներբեռնել PDF տարբերակը այստեղ Տարբերությունը RNASE A-ի և RNASE H-ի միջև
