Հիմնական տարբերություն – տաք և սառը տրիպսինացում
Ջերմ և սառը տրիպսինացումը երկու մեթոդներ են, որոնք օգտագործվում են կենդանիների բջիջների մշակման մեջ բջիջների ֆերմենտային տարանջատման համար: Տաք և սառը տրիպսինացման հիմնական տարբերությունը, ինչպես հուշում են անունները, կախված է այն ջերմաստիճանից, որում տրիպսինը ավելացվում է բջջային տարանջատման համար: Ջերմ տրիպսինացումը տեղի է ունենում ավելի բարձր ջերմաստիճանի պայմաններում (36,5 – 37 0C), մինչդեռ սառը տրիպսինացումը տեղի է ունենում ցածր ջերմաստիճանի պայմաններում:
Կենդանական բջիջների առաջնային բջիջների մշակման գործընթացում կան երեք հիմնական մեթոդներ, որոնք կիրառվել են և ապացուցվել են իրենց հաջողությամբ:Երեք մեթոդները ներառում են բջիջների մեխանիկական տարանջատում, բջիջների ֆերմենտային տարանջատում և առաջնային արտամղման տեխնիկա: Բջիջների ֆերմենտային տարանջատումը հանգեցնում է բջիջների մեկուսացմանը, և դա կատարվում է սպիտակուցը քայքայող տրիպսին ֆերմենտի միջոցով: Հետեւաբար, այս գործընթացը հայտնի է որպես Trypsinization: Տրիպսինացումը կարող է իրականացվել երկու տարբեր պայմաններում՝ տաք տրիպսինացում և սառը տրիպսինացում: Ջերմ տրիպսինացումը տաք պայմաններում 36,5 – 37 0C ջերմաստիճանում բջիջները տրիպսինով մշակելու մեթոդ է: Սառը տրիպսինացումը տրիփսինով մշակման գործընթացն է, որը տեղի է ունենում ավելի ցուրտ պայմաններում, գերադասելի է սառույցի մեջ՝ պահպանելով շատ ցածր ջերմաստիճան:
Ի՞նչ է ջերմ տրիպսինացումը:
Տրիպսինացումը կարող է իրականացվել բջջային բաղադրիչները տարանջատելու համար, որպեսզի բջիջները մեկուսացվեն՝ առաջնային բջիջների կուլտուրա արտադրելու համար: Տրիպսինը սպիտակուցի քայքայման ֆերմենտ է, և տրիպսինացման համար օգտագործվող ֆերմենտային խառնուրդը կարող է լինել կամ չմշակված էքստրակտ կամ մաքրված արտադրանք:Ասում են, որ չմշակված էքստրակտն ավելի արդյունավետ է սպիտակուցի լիզման և բջիջների քայքայման համար, քանի որ այն պարունակում է այլ դեգրադացնող ֆերմենտներ:
Ջերմ տրիպսինացումը բջիջների տարանջատման առավել հաճախ օգտագործվող ֆերմենտային մեթոդն է, որը տեղի է ունենում ավելի բարձր ջերմաստիճանի պայմաններում: Նախքան տրիպսինիզացիայի միջոցով բուժումը, ցանկալի հյուսվածքը մանրացված է: Այն հեշտացնում է հեշտ տարանջատման գործընթացը: Այնուհետև կտրատված հյուսվածքը լվանում են հատուկ միջավայրում, որը հայտնի է որպես Dissection Basal S alt միջավայր:
Լվացքի փուլի ավարտից հետո բջիջները վերածվում են կոլբայի, որը պարունակում է ակտիվ ֆերմենտը, որը տրիպսինն է: Քանի որ այս տեխնիկան ենթադրում է տաք տրիպսինացման արձանագրություն, տրիպսինը տեղադրվում է մոտավորապես 37 0C ջերմաստիճանում մոտ չորս ժամ:
Նկար 01. տրիպսին
Բովանդակությունը խառնվում և խառնվում է ցենտրիֆուգացման մեթոդների կիրառմամբ՝ արձանագրության հեշտության և տարանջատման գործընթացը արագացնելու համար: Առաջարկվող ժամանակի հասնելուց հետո բջիջները կարող են ստացվել գերնորից: Վերևից ստացված բջիջներն այնուհետև ինկուբացվում են որոշակի ջերմաստիճանում և ժամանակում:
Ի՞նչ է սառը տրիպսինիզացիան:
Սառը տրիպսինացումը տրիպսինացման մյուս տեսակն է, որը տեղի է ունենում ցուրտ պայմաններում: Այս տեխնիկայում մանրացված և լվացվող բջիջները տեղադրվում են սրվակների մեջ սառույցի վրա, այնուհետև թրջվում տրիպսինով: Թրջման ժամկետը շատ ավելի երկար է՝ մոտ 6 – 24 ժամ։
Թրջման ընթացակարգի ավարտից հետո տրիպսինը հեռացվում է բջիջների լիզատից, և հյուսվածքների կտորները հետագայում ինկուբացվում են 37 0C ջերմաստիճանում մոտ 20-30 րոպե: Բջիջների տարանջատումը տեղի է ունենում հյուսվածքային խառնուրդի կրկնակի պիպերթինգով:Դա թույլ կտա բջիջներին տարանջատվել թաղանթից և գալ դեպի վերին նյութ: Երբ բջիջները գտնվում են վերին հեղուկում, դրանք ինկուբացվում և աճում են ցանկալի ջերմաստիճանում և ժամանակաշրջանում:
Սառը տրիպսինացման մեթոդը մի քանի առավելություն ունի
- Կենսունակ բջիջների ավելի բարձր բերքատվություն, քանի որ բջիջների վնասը նվազագույնի է հասցվում: Բջիջների վնասը նվազագույնի է հասցվում՝ չօգտագործելով ցենտրիֆուգման քայլեր:
- Բարձր հարմար մեթոդ։
- Ավելի քիչ աշխատասեր.
Սառը տրիպսինացման մեթոդի հիմնական սահմանափակումն այն է, որ մեծ քանակությամբ չեն կարող օգտագործվել մեկ օրինակում:
Որո՞նք են նմանությունները տաք և սառը տրիպսինացման միջև:
- Եվ տաք և սառը տրիպսինացման գործընթացները օգտագործում են տրիպսին ֆերմենտը բջիջների տարանջատման համար:
- Եվ տաք և սառը տրիպսինացման գործընթացները օգտագործվում են բջիջների կուլտուրայի ընթացակարգերում բջիջների տարանջատման համար:
- Ե՛վ տաք, և՛ սառը տրիպսինիզացիայի բուժման պրոցեդուրաներում բջիջները ստացվում են վերին հեղուկից:
Ո՞րն է տարբերությունը տաք և սառը տրիպսինիզացիայի միջև:
Ջերմ ընդդեմ սառը տրիպսինիզացիա |
|
| Ջերմ տրիպսինիզացիան 36,5 – 37 ջերմաստիճանի պայմաններում բջիջները տրիպսինով մշակելու մեթոդ է 0: | Սառը տրիպսինացումը տրիփսինով մշակման գործընթացն է, որը տեղի է ունենում ավելի ցուրտ պայմաններում, գերադասելի է սառույցի մեջ՝ պահպանելով շատ ցածր ջերմաստիճան: |
| Արձանագրություն | |
| Թակած հյուսվածքի կտորները պահպանվում են 37 0C անընդհատ ողջ ընթացակարգի ընթացքում: | Թակած հյուսվածքի կտորները սկզբում պահվում են սառցե ջերմաստիճանում, այնուհետև պահվում են 37 0: |
| Ջերմաստիճան | |
| Ջերմ տրիպսինացում տեղի է ունենում 36,5 – 37 0 | Սառը տրիպսինիզացիան տեղի է ունենում սառցե ցրտերի ջերմաստիճանում: |
| սպառված ժամանակ | |
| Ավելի քիչ ժամանակ է պահանջվում տաք տրիպսինացման ողջ գործընթացի համար (մոտ 4 ժամ): | Ավելի երկար ժամանակ է պահանջվում (մոտ 6 – 24 ժամ) սառը տրիպսինիզացիայի համար։ |
| Կենսունակ բջիջների բերքատվություն | |
| Ցածր տաք տրիպսինիզացիա։ | Սառը տրիպսինիզացիայի բարձր մակարդակ։ |
| Ցենտրիֆուգացիայի օգտագործում | |
| Ցենտրիֆուգացիա է պահանջվում տաք տրիպսինիզացիայի ժամանակ բջիջների տարանջատման համար: | Ցենտրիֆուգացիա չի պահանջվում սառը տրիպսինիզացիայի ժամանակ: |
| Հյուսվածքի սկզբնական քանակությունը տրիպսինիզացիայի համար | |
| Ավելի մեծ քանակությամբ հյուսվածք կարող է օգտագործվել տաք տրիպսինիզացիայի համար: | Ավելի փոքր քանակությամբ հյուսվածք կարող է օգտագործվել սառը տրիպսինիզացիայի ժամանակ: |
| Բջջի վնաս | |
| Բարձր՝ ցենտրիֆուգման պատճառով տաք տրիպսինիզացիայի ժամանակ: | Ավելի քիչ սառը տրիպսինացման պատճառով: |
Ամփոփում – Ջերմ ընդդեմ սառը տրիպսինիզացիա
Տրիպսինացումը սպիտակուցը քայքայող տրիպսին ֆերմենտի օգտագործման մեթոդ է՝ բջիջների մշակման գործընթացում առաջնային բջիջների կուլտուրաների տարանջատման և պատրաստման համար: Գոյություն ունեն տրիպսինացման երկու հիմնական տեխնիկա՝ հիմնված ընթացակարգի ընթացքում օգտագործվող ջերմաստիճանների վրա: Դրանք տաք և սառը տրիպսինացում են։ Ջերմ տրիպսինացումն իրականացվում է 37 0C ջերմաստիճանում, մինչդեռ սառը տրիպսինացումն իրականացվում է սառցե սառը պայմաններում:Չնայած սառը տրիպսինիզացիան ավարտելու համար ավելի երկար ժամանակ է պահանջում, ասվում է, որ այն ունի կենսունակ բջիջների ավելի բարձր բերքատվություն: Սա պայմանավորված է այն հանգամանքով, որ բջիջների վնասը նվազագույնի է հասցվում սառը տրիպսինիզացիայի ժամանակ, քանի որ այն չի օգտագործում ցենտրիֆուգացման բուռն քայլեր: Սա է տարբերությունը տաք և սառը տրիպսինացման միջև։
