Տարբերությունը Phusion-ի և Taq Polymerase-ի միջև

2024 Հեղինակ: Alex Aldridge | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-17 13:41

Հիմնական տարբերություն – Ֆյուզիոն ընդդեմ Taq պոլիմերազի

ԴՆԹ պոլիմերազները լայնորեն օգտագործվող ֆերմենտներ են մոլեկուլային կենսաբանության տեխնիկայում և բնականաբար առկա են նաև բոլոր օրգանիզմներում, որոնք ենթարկվում են ԴՆԹ-ի վերարտադրության: Դրանք հիմնական պոլիմերացնող ֆերմենտներն են, որոնք ներգրավված են վերարտադրության ժամանակ: ԴՆԹ պոլիմերազն ի վիճակի է նուկլեոտիդներ ավելացնել ԴՆԹ-ի շղթայի ազատ 3' ծայրին՝ դրանով իսկ առաջացնելով նոր շղթայի երկարացում: Ներկայումս հիվանդությունների ախտորոշման և արդյունաբերական կիրառության մեջ մոլեկուլային կենսաբանության զարգացումների շնորհիվ կարևոր է տարբեր օգտակար հատկություններ ունեցող պոլիմերազների արտադրությունը: Սա մեծացնում է մեթոդի ճշգրտությունը և դարձնում այն ավելի արագ տեխնիկա:Phusion-ը և Taq պոլիմերազը երկու կոմերցիոն արտադրված ջերմակայուն պոլիմերազային ֆերմենտներ են, որոնք օգտագործվում են հատուկ մոլեկուլային ծրագրերում: Phusion-ը Pyrococcus furiosus-ից մեկուսացված ԴՆԹ պոլիմերազ է և հիմնականում օգտագործվում է կլոնավորման փորձերում՝ հավատարմությունը բարձրացնելու համար: Taq ԴՆԹ պոլիմերազը ստանդարտ ԴՆԹ պոլիմերազն է, որն օգտագործվում է պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայում (PCR), և այն մեկուսացված է ջերմակայուն բակտերիայից. Ջրային թերմուս. Երկու ֆերմենտների հիմնական տարբերությունը աղբյուրի միկրոօրգանիզմն է: Ֆյուզիոնը մեկուսացված է էքստրեմոֆիլից՝ Pyrococcus furiosus-ից, մինչդեռ Taq պոլիմերազը մեկուսացված է թերմոֆիլից՝ Thermus aquaticus-ից:

Ի՞նչ է Phusion-ը:

Phusion ԴՆԹ պոլիմերազը նոր պոլիմերազ է, որն արտադրվում է Pyrococcus furiosus ֆերմենտի մեկուսացման միջոցով, որը էքստրեմոֆիլ Archaea է: Այս մանրէները բնակվում են չափազանց բարձր ջերմաստիճանի պայմաններում՝ դրանով իսկ դարձնելով պոլիմերազը բարձր ջերմակայուն պոլիմերազ։ Ֆյուզիոն պոլիմերազը օգտագործվում է սովորական ջերմակայուն պոլիմերազի նկատմամբ ծայրահեղ հավատարմություն ստանալու համար. Taq պոլիմերազ. Ֆյուզիոն պոլիմերազը կարող է ուժեղացնել երկար կաղապարներ մինչև 7,5 կբ գենոմային ԴՆԹ: Phusion պոլիմերազի պոլիմերացման օպտիմալ հզորությունը 72^{0 C է: Phusion-ը նաև օգտագործվում է կլոնավորման արտադրանքներում հաջորդականության, արտահայտման վերլուծության և մուտացիաների վերլուծության համար:}

Ֆյուզիոն ԴՆԹ պոլիմերազն ունի 3'-5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Սա թույլ է տալիս սրբագրել նոր սինթեզված շարանը սինթեզից հետո: Այսպիսով, նուկլեոտիդների անհամապատասխանությունները հեշտությամբ վերականգնվում են: Այսպիսով, այն ունի ավելի փոքր սխալի մակարդակ: Phusion պոլիմերազի ընդհանուր առավելություններն են՝

• Ծայրահեղ հավատարմություն
• Բարձր արագությամբ և կրճատված երկարաձգման ժամանակ
• Ուժեղ ռեակցիաներ և պահանջում է նվազագույն օպտիմալացում
• Բարձր եկամտաբերություն

Նկար 01. Ֆյուզիոն

Phusion պոլիմերազի հիմնական թերությունն այն է, որ այն արգելակվում է դեզօքսյուրիդին տրիֆոսֆատի (dUTP) առկայության դեպքում: Երբ dUTP-ները կուտակվում են ռեակցիայի խառնուրդում, այն կարող է արգելակել Phusion պոլիմերազի գործողությունները: Դա կանխվում է ռեակցիայի խառնուրդը dUTPase-ով մշակելով՝ նախքան ֆերմենտը ավելացնելը: Ներկայումս Phusion պոլիմերազի dUTP-դիմացկուն տարբերակը, որը հայտնի է որպես Pfu Turbo, օգտագործվում է Phusion պոլիմերազի փոխարեն՝ որպես այս խնդրի լուծում:

Ի՞նչ է Taq Polymerase?

Taq ԴՆԹ պոլիմերազի գյուտը հեղափոխություն է արել մոլեկուլային կենսաբանության ոլորտում: Այն լուծեց ԴՆԹ-ի ուժեղացման հիմնական խնդիր: Taq DNA պոլիմերազը ջերմակայուն պոլիմերազային ֆերմենտ է, որը արդյունահանվում և մեկուսացված է ջերմասեր բակտերիայից՝ Thermus aquaticus-ից: Այս ֆերմենտի հայտնաբերումը հանգեցնում է ՊՇՌ-ի զարգացմանը: Այս ֆերմենտը թույլ է տվել օգտագործել պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա ԴՆԹ-ի ամպլիֆիկացման մեջ՝ սովորական կլոնավորման տեխնիկայի փոխարեն:PCR-ն այժմ օգտագործվում է մոլեկուլային ախտորոշման, գյուղատնտեսության և արդյունաբերության ոլորտներում՝ տեխնիկային ավելացված բազմաթիվ նոր տարբերակներով:

Նկար 02. Taq պոլիմերազ

Taq ԴՆԹ պոլիմերազը գործում է օպտիմալ ջերմաստիճանի միջակայքում 72⁰C – 80^{0C: Taq ԴՆԹ պոլիմերազը պահանջում է համագործոն; մագնեզիում իր գործառույթի համար: Taq պոլիմերազը չունի 3'-5' սրբագրման ունակություն, հետևաբար, Taq ԴՆԹ պոլիմերազի սխալի մակարդակը բարձր է ԴՆԹ պոլիմերազների ավելի նոր տեսակների համեմատ, ինչպիսիք են Phusion պոլիմերազը և այլն: Բայց Taq ԴՆԹ պոլիմերազի ժողովրդականությունը մնում է նույնը ողջ գիտության աշխարհում՝ շնորհիվ ֆերմենտի հարմարության և ճկունության:}

Որո՞նք են նմանությունները Phusion-ի և Taq պոլիմերազի միջև:

• Եվ Phusion և Taq պոլիմերազային ֆերմենտները պոլիմերացնող ֆերմենտներ են, որոնք ունակ են նուկլեոտիդներ ավելացնել ԴՆԹ-ի շղթայի 3' ազատ ծայրին:
• Եվ Phusion, և Taq պոլիմերազները պահանջում են այբբենարանային հաջորդականություն՝ պոլիմերացումը սկսելու համար:
• Եվ Phusion, և Taq պոլիմերազները ջերմակայուն են:
• Եվ Phusion, և Taq պոլիմերազները օգտագործվում են PCR մեխանիզմներում ԴՆԹ-ի ուժեղացման համար:
• Պոլիմերազը ռեակցիայի խառնուրդին ավելացնելիս և՛ Phusion, և՛ Taq պոլիմերազներն ավելացվում են վերջինը՝ ֆերմենտի արդյունավետությունն ապահովելու համար:
• Եվ Phusion, և Taq պոլիմերազները կոմերցիոնորեն սինթեզվում են մոլեկուլային կենսաբանության փորձարարական նպատակներով:
• Եվ Phusion, և Taq պոլիմերազները պահանջում են կոֆակտոր՝ իր գործառույթն ավարտելու համար:

Ո՞րն է տարբերությունը Phusion-ի և Taq Polymerase-ի միջև:

Phusion vs Taq Polymerase
Phusion-ը Pyrococcus furiosus-ից մեկուսացված ԴՆԹ պոլիմերազ է և հիմնականում օգտագործվում է կլոնավորման փորձերում՝ հավատարմությունը բարձրացնելու համար:	Taq ԴՆԹ պոլիմերազը ստանդարտ ԴՆԹ պոլիմերազն է, որն օգտագործվում է պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայում (PCR) և այն մեկուսացված է ջերմակայուն բակտերիայից՝ Thermus aquaticus-ից:
Աղբյուր Օրգանիզմ
Phusion-ը վերցված է էքստրեմոֆիլ արխեայից՝ Pyrococcus furiosus:	Այս գրական ստեղծագործությունները ընդգրկում են գաղութացման շրջանից մինչև ապագաղութացման շրջանը։
Ապացույց կարդալու ունակություն
3' – 5' ապացույց կարդալու ունակությունը առկա է Phusion-ում:	3' – 5' ապացույց կարդալու ունակությունը բացակայում է Taq պոլիմերազում:
Հավատարմություն
Բարձր հավատարմությունը կա Phusion-ի հետ:	Taq պոլիմերազը ցույց է տալիս ցածր հավատարմություն:
ուժեղացում
Phusion-ն ի վիճակի է ուժեղացնել ԴՆԹ-ի երկար բեկորները:	Taq պոլիմերազը կարող է ուժեղացնել ԴՆԹ-ի շատ ավելի կարճ բեկորները:
dUTP թունավորում
Phusion-ի գործողությունը արգելակվում է կուտակման տարօրինակով:	Taq պոլիմերազը չի արգելակվում dUPT-ով:

Ամփոփում – Phusion ընդդեմ Taq պոլիմերազի

Phusion-ը և Taq DNA պոլիմերազը երկու ջերմակայուն պոլիմերազներ են, որոնք օգտագործվում են ՊՇՌ տեխնիկայում: Phusion-ը պոլիմերազ է, որը մեկուսացված է էքստրեմոֆիլից՝ Pyrococcus furiosus-ից, մինչդեռ Taq-ը մեկուսացված է ջերմակայուն բակտերիայից Thermus aquaticus:Taq ԴՆԹ պոլիմերազի հայտնաբերումը հանգեցնում է PCR գյուտի: Phusion-ն ունի բազմաթիվ առավելություններ Taq-ի նկատմամբ, ինչը Phusion-ը դարձրել է ավելի լավ տարբերակ բարձր հավատարմության ԴՆԹ-ի արտադրության համար: Այնուամենայնիվ, Taq պոլիմերազը դեռ օգտագործվում է որպես ստանդարտ պոլիմերազային ֆերմենտ PCR-ում: Սա է տարբերությունը Phusion-ի և Taq պոլիմերազի միջև: