Հիմնական տարբերություն – Նիտրոցելյուլոզ ընդդեմ PVDF
Western blotting-ը մեթոդ է, որը թույլ է տալիս հայտնաբերել և քանակականացնել հատուկ սպիտակուցները սպիտակուցի նմուշից: Տեխնիկայի հուսալիությունը կախված է գելից սպիտակուցների կլանման համար ճիշտ թաղանթի ընտրությունից: Տարբեր տեսակի միկրոծակոտկեն թաղանթներ կան։ Նիտրոցելյուլոզային և PVDF թաղանթները երկու նման թաղանթներ են, որոնք նախընտրում են հետազոտողները՝ իրենց հատուկ հատկանիշների պատճառով, մյուս տեսակի թաղանթների նկատմամբ: Նիտրոցելյուլոզայի կամ PVDF-ի միջև ընտրությունը նույնպես ևս մեկ մարտահրավեր է western blotting-ում: Ե՛վ նիտրոցելյուլոզը, և՛ PVDF-ն ունեն սպիտակուցի կլանման բարձր կարողություն:Նիտրոցելյուլոզայի և PVDF թաղանթի հիմնական տարբերությունն այն է, որ նիտրոցելյուլոզային թաղանթները չունեն հակամարմինները հանելու և թաղանթը հակամարմինները նորից զննելու համար օգտագործելու ունակություն, մինչդեռ PVDF մեմբրաններն ունեն մերկացման և վերօգտագործման ունակություն::
Ի՞նչ է նիտրոցելյուլոզը:
Նիտրոցելյուլոզը պոլիմեր է, որն արտադրվում է ցելյուլոզը ազոտաթթուով մշակելու միջոցով և օգտագործվում է մոլեկուլային կենսաբանության մեջ միկրոծակոտկեն թաղանթներ պատրաստելու համար, հատկապես բլոտավորման մեթոդների համար, ինչպիսիք են հարավային, հյուսիսային և արևմտյան բլոտը: Նիտրոցելյուլոզային թաղանթների ծակոտիների չափերը տատանվում են 3-ից 20 մկմ: Նիտրոցելյուլոզային միկրոծակոտկեն թաղանթները հեշտացնում են մեմբրանի մակերեսին տեղի ունեցող իմունաքիմիական ռեակցիայի հայտնաբերումը: Հետևաբար, նիտրոցելյուլոզային թաղանթները հաճախ օգտագործվում են սպիտակուցների անշարժացման և վեստերն բլոտում հատուկ սպիտակուցների հայտնաբերման համար: Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները կարող են նաև անշարժացնել գլիկոպրոտեինները և նուկլեինաթթուները:
Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները նախընտրելի են կողային հոսքի վերլուծության մեջ մի քանի առանձնահատկությունների պատճառով:Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները կլանում են սպիտակուցները բարձր կոնցենտրացիայով: Թաղանթը թրջելու համար օգտագործվող լուծիչը չի նվազեցնում նիտրոցելյուլոզային մեմբրանի սպիտակուցի կլանումը: Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները հեշտությամբ կարելի է կտրել գելի ցանկալի չափով և սպիտակուցները գելից թաղանթ փոխանցել էլեկտրական կամ մազանոթային փոխանցման միջոցով: Նիտրոցելյուլոզը թույլ է տալիս սպիտակուցների ավելի արագ հոսքը մեմբրանի միջով բարձր կապող պոտենցիալով: Նիտրոցելյուլոզը ցույց է տալիս բեռնաթափման բարելավված ուժ: Նիտրոցելյուլոզային թաղանթի մեկ այլ հատուկ հատկանիշ այն է, որ այն հեշտությամբ կարող է սոսնձվել ոչ լուծիչ ջրակայուն սոսինձներով տարբեր պլաստիկ թաղանթների վրա:
Նկար 01. Նիտրոցելյուլոզային թաղանթ Western blotting-ի համար
Ինչ է PVDF?
Պոլիվինիլիդեն դիֆտորիդը (PVDF) ֆտորոպոլիմեր է, որն արտադրվում է վինիլիդեն դիֆտորիդի պոլիմերացման արդյունքում և ունի սպիտակուցների անշարժացման բարձր ունակություն:Հետևաբար, PVDF-ից պատրաստված միկրոծակոտկեն թաղանթները օգտագործվում են western blotting տեխնիկայում՝ սպիտակուցների խառնուրդներից հատուկ սպիտակուցներ վերլուծելու համար: PVDF մեմբրանները կարող են օգտագործվել նաև ամինաթթուների վերլուծության և սպիտակուցների հաջորդականության համար: Նիտրոցելյուլոզային թաղանթի վրա PVDF մեմբրանի ամենակարևոր հատկանիշն այն է, որ այն հեշտությամբ կարող է հանվել հակամարմիններից և նորից օգտագործվել հակամարմինների հետագա զոնդերի համար:
PVDF թաղանթները ավելի հաստ են, քան նիտրոցելյուլոզային թաղանթները; հետևաբար, ավելի դիմացկուն է վերաօգտագործման ժամանակ վնասների նկատմամբ: PVDF մեմբրանները բարձր հիդրոֆոբ են: Ուստի դրանք օգտագործելուց առաջ պետք է թրջել մեթանոլի կամ իզոպրոպանոլի մեջ։
Ո՞րն է տարբերությունը Nitrocellulose-ի և PVDF-ի միջև:
Նիտրոցելյուլոզ ընդդեմ PVDF |
|
| Նիտրոցելյուլոզը պոլիմեր է, որը կազմված է ցելյուլոզից: | PVDF-ը ֆտորոպոլիմեր է, որն արտադրվում է վինիլիդեն դիֆտորիդի պոլիմերացման արդյունքում: |
| Մեմբրանի ծակոտիների չափ | |
| Ծակոտիների բնորոշ չափերն են 0.1, 0.2 կամ 0.45μ | Ծակոտիների բնորոշ չափերն են 0,1, 0,2 կամ 0,45 մկմ |
| Սպիտակուցներ կապող հզորություն | |
| Նիտրոցելյուլոզը սպիտակուցին կապող կարողություն ունի 80-ից 100 մկգ/սմ2. | PVDF-ն ունի սպիտակուցին կապող հզորություն 170-ից 200 մկգ/սմ2. |
| Զգայունություն | |
| Սա ցածր զգայունություն ունի PVDF-ի համեմատ: | Սա ունի բարձր զգայունություն: |
| Ցածր արտահայտված սպիտակուցների հայտնաբերում | |
| Քանի որ նիտրոցելյուլոզային թաղանթների զգայունությունը ցածր է, այն հարմար չէ ցածր արտահայտված սպիտակուցների հայտնաբերման համար: | Սա ավելի հարմար է ցածր արտահայտված սպիտակուցների հայտնաբերման համար՝ շնորհիվ իր բարձր զգայունության: |
| Ֆոնային աղմուկ | |
| Սա ավելի ցածր ֆոնային աղմուկ ունի | Սա ավելի բարձր ֆոնային աղմուկ ունի: |
| Փոխազդեցություն սպիտակուցների հետ | |
| Սպիտակուցի մոլեկուլները կապվում են նիտրոցելյուլոզային թաղանթներին հիդրոֆոբ փոխազդեցությունների միջոցով: | Սպիտակուցները կապվում են PVDF թաղանթներին հիդրոֆոբ և դիպոլային փոխազդեցությունների միջոցով: |
| Մեմբրանի բնույթ | |
| Նիտրոցելյուլոզը փխրուն է և փխրուն: Այնուամենայնիվ, նիտրոցելյուլոզայի տարբերակները մատչելի են, և դրանք դիմացկուն են: | PVDF-ն ավելի դիմացկուն է և ունի ավելի բարձր քիմիական դիմադրություն: |
| Հնարավորություն հանելու և նորից օգտագործելու | |
| Նիտրոցելյուլոզը կարող է դժվարություններ ունենալ առանց ազդանշանի կորստի մերկացնելու և նորից զտելու համար: | PVDF-ն իդեալական է կիրառությունների վերստուգման և հաջորդականության համար: |
| Համապատասխանություն | |
| Նիտրոցելյուլոզը իդեալական է ցածր մոլեկուլային քաշով սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար: | PVDF-ն ավելի հարմար է ավելի բարձր մոլեկուլային քաշով սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար: |
| Այլ կիրառումներ | |
| Նիտրոցելյուլոզը կարող է օգտագործվել նուկլեինաթթվի վերլուծության և կետային/սլոտային բլոթի համար: | PVDF-ը կարող է օգտագործվել սպիտակուցների հաջորդականության և պինդ փուլային վերլուծության համակարգերի համար: |
| Արժեքը | |
| Սա ավելի էժան է, քան PVDF թաղանթները: | Սա ավելի թանկ է, քան նիտրոցելյուլոզային թաղանթները: |
| Նախնական թրջման կարիք | |
| Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները չեն պահանջում նախապես թրջել մեթանոլով | PVDF թաղանթները պահանջում են նախապես թրջել մեթանոլով: |
Ամփոփում – Նիտրոցելյուլոզ ընդդեմ PVDF
Նիտրոցելյուլոզային թաղանթները առաջին թաղանթներն էին, որոնք առևտրային կերպով օգտագործվեցին կողային հոսքի վերլուծության համար: Նրանք ունեն սպիտակուցներ կլանելու մեծ կարողություն։ Հետեւաբար, նիտրոցելյուլոզային թաղանթները օգտագործվում են western blotting-ում: PVDF-ը մեմբրանի մեկ այլ տեսակ է, որն օգտագործվում է Western blotting-ում, և այն նաև ունի սպիտակուցի կլանման բարձր կարողություն: Երկու տեսակներն էլ օգտագործվում են western blotting-ում՝ սպիտակուցի վերլուծության համար: Այնուամենայնիվ, PVDF մեմբրաններն ունեն ավելի հատուկ ատրիբուտներ, ինչը նրանց դարձնում է ավելի հարմար, քան նիտրոցելյուլոզային թաղանթները western blotting-ի համար: Բայց նիտրոցելյուլոզային մեմբրանները ավելի հարմար են ցածր մոլեկուլային կշռված սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար, PVDF մեմբրաններն ավելի հարմար են բարձր մոլեկուլային կշռված սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար:Սա է տարբերությունը նիտրոցելյուլոզային և PVDF թաղանթների միջև:
