Հիմնական տարբերություն – Ընտրելի Մարկեր ընդդեմ Լրագրողի Գենի
Գենետիկական ինժեներիայի տեխնիկան օգտագործվում է կարևոր գեները օրգանիզմից այլ օրգանիզմ տեղափոխելու համար: Օտար գենի ներմուծումն այլ օրգանիզմի գենոմի մեջ և դրա արտահայտումը հյուրընկալող բջիջում գեների փոխանցման ամենադժվար քայլերն են: Փոխակերպման գործընթացի հաջողությունը հայտնաբերելու համար ռեկոմբինանտ մոլեկուլում օգտագործվում են ընտրելի մարկեր և ռեպորտաժային գեն: Ընտրելի մարկերը ԴՆԹ-ի հաջորդականությունն է կամ գենը, որն արտահայտում և ընտրում է փոխակերպված բջիջները չփոխակերպված բջիջներից: Լրագրող գենը ևս մեկ գեն է, որն օգտագործվում է փոխակերպված բջիջները տարբերելու և հյուրընկալողի ներսում ներդրված գենի գործառույթը քանակականացնելու կամ հայտնաբերելու համար:Ընտրելի մարկերի և ռեպորտաժի գենի հիմնական տարբերությունն այն է, որ ընտրվող մարկերն օգտագործվում է չվերափոխված բջիջները զննելու և փոխակերպված բջիջները ազդանշան տալու համար, մինչդեռ ռեպորտաժի գենն օգտագործվում է հյուրընկալողի ներսում գենի արտահայտման մակարդակը քանակականացնելու համար:
Ի՞նչ է ընտրելի նշիչը:
Գենետիկական ճարտարագիտության մեջ հետաքրքրող գենը տեղադրվում է համապատասխան վեկտորի մեջ և փոխակերպվում հյուրընկալ օրգանիզմների: Այնուամենայնիվ, փոխակերպումը հաջող է ընթանում միայն իրավասու ընդունող բջիջներում, և հյուրընկալող բջիջների կողմից օտար ԴՆԹ-ի կլանումը մերժելու հնարավորություն կա: Հետևաբար, փոխակերպված և չվերափոխված բջիջների տարբերակումը կարևոր է շարունակել հետագա փորձերը: Հետևաբար, հետազոտողները վեկտորում ընդգրկում են ընտրելի մարկեր գեն՝ չվերափոխված բջիջներից վերափոխված բջիջների հեշտ ընտրության համար: Ընտրելի մարկերը ԴՆԹ-ի հաջորդականությունն է, հատկապես գենը, որն օգտակար է վերափոխված բջիջների նույնականացման համար: Այս մարկերային գենը ցուցադրում է մի հատկանիշ, որը համապատասխանում է փոխակերպված բջիջների արհեստական ընտրությանը ոչ փոխակերպված բջիջներից միջավայրի վրա:
Մոլեկուլային կենսաբանության մեջ օգտագործվող առավել տարածված ընտրելի մարկերները հակաբիոտիկների դիմացկուն գեներն են: Հակաբիոտիկների դիմադրության գենը տեղադրվում է վեկտորի մեջ և փոխակերպվում հյուրընկալող բջիջների, հատկապես հյուրընկալող բակտերիային: Այդ կոնկրետ հակաբիոտիկը ներառված է բակտերիաների աճող միջավայրում: Ընտրողական մարկերի առկայության պատճառով ընտրովի պայմաններում կարող են գոյատևել միայն բջիջները, որոնք պարունակում են համապատասխան ընտրելի մարկեր: Ոչ փոխակերպված բջիջները չեն կարողանում աճել հակաբիոտիկ պարունակող միջավայրում: Հետևաբար, հակաբիոտիկներին դիմացկուն ընտրվող մարկերի շնորհիվ, փոխակերպված բջիջները հեշտությամբ հայտնաբերվում են:
Գենները, որոնք տալիս են հակամետաբոլիտների, թունաքիմիկատների հատկություններ, օգտագործվում են որպես ընտրովի մարկերներ բույսերի գենետիկական ճարտարագիտության մեջ կլոնավորման վեկտորներում: Այնուամենայնիվ, սելեկտիվ մարկերների այս համատեղ փոխակերպումը գենետիկորեն ձևափոխված օրգանիզմների բացասական ազդեցություն ունի շրջակա միջավայրի և մարդու վրա: Հակաբիոտիկների դիմացկուն բակտերիաների արտազատումը կարող է մեծացնել մարդու պաթոգենների հակաբիոտիկների դիմադրողականությունը:Այն կարող է աղտոտել արտադրանքը կամ կենսազանգվածը հակաբիոտիկներով և կարող է կորցնել ընտրողական ճնշումը հակաբիոտիկների քայքայման և ապաակտիվացման արդյունքում:
Նկար 01. Պլազմիդային վեկտոր գեների փոխանցման համար՝ ընտրելի մարկերով
Ի՞նչ է լրագրողի գենը:
Զեկուցող գեները գեներ են, որոնք հնարավորություն են տալիս հայտնաբերել կամ չափել ներդրված գենի արտահայտումը: Այս ռեպորտաժային գեները կարող են կցվել հետաքրքրող գենի կարգավորող հաջորդականություններին, որպեսզի ազդարարեն արտահայտման տեղը կամ մակարդակները: Հետևաբար, նույն պրոմոտորի տակ գեների արտահայտման ընթացքում դրանք տառադարձվում են մեկ mRNA հաջորդականության և այնուհետև վերածվում սպիտակուցի, որը կարող է ցույց տալ գեների արտահայտման մակարդակը:
Լրագրող գեները տարբեր տեսակի են, և դրանք պարունակում են տեսողականորեն ճանաչելի բնութագրեր, որոնք սովորաբար ներգրավված են լյումինեսցենտ և լյումինեսցենտ սպիտակուցներում:Գենները, որոնք ծածկագրում են լյումինեսցենտ սպիտակուցը և ֆերմենտները, անտեսանելի սուբստրատները փոխակերպում են լյումինեսցենտային կամ գունավոր արտադրանքի՝ ազդարարելով գենի հաջող արտահայտումը և հնարավորություն տալով քանակականացնել գենի էքսպրեսիան:
Նկար 02. Լրագրող գենի արտահայտություն
Ո՞րն է տարբերությունը Selectable Marker-ի և Reporter Gene-ի միջև:
Ընտրելի Մարկեր ընդդեմ Լրագրողի Գենի |
|
| Ընտրելի մարկերը ԴՆԹ-ի մի տեսակ հաջորդականություն է, որն օգնում է տարբերել փոխակերպված բջիջները չփոխակերպված բջիջներից: | Reporter գենը գեն է, որն օգնում է քանակականացնել հյուրընկալող բջիջում տեղադրված ցանկալի գենի արտահայտությունը: |
| Արտադրված միավորների բնույթը | |
| Գեները կոդավորված են բնութագրերով, որոնք օգնում են աճող միջավայրում արհեստական ընտրությանը: | Գեները կոդավորված են տեսողականորեն ճանաչելի հատկանիշներով: |
| Օգտագործում | |
| Հակաբիոտիկների դիմադրողականության գեները, հակամետաբոլիտային գեները, թունաքիմիկատների դիմադրության գեները և այլն, օրինակներ են ընտրելի մարկերի համար: | Կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուցի, β-գլյուկուրոնիդազի, քլորամֆենիկոլ ացետիլտրանսֆերազի, կարմիր լյումինեսցենտ սպիտակուցի և այլնի գեների կոդը օրինակներ են: |
Ամփոփում – Ընտրելի Մարկեր vs Reporter Gene
Ընտրելի մարկերները թույլ են տալիս փոխակերպված բջիջներին աճել որոշակի հակաբիոտիկով կամ թունաքիմիկատներով չափաբաժնով ընտրովի միջավայրում: Դրանք օգտագործվում են վերափոխված բջիջների վաղ ընտրության համար։Զեկուցող գեները օգտագործվում են ներմուծված ցանկալի գենի արտահայտման մակարդակը քանակականացնելու համար: Նրանք նաև թույլ են տալիս տարբերակել փոխակերպված և չվերափոխված բջիջները: Սա է տարբերությունը ընտրվող մարկերի և ռեպորտաժի գենի միջև: Ե՛վ ընտրովի մարկեր, և՛ ռեպորտաժային գենը համարվում են կարևոր մարկերներ գենետիկական ինժեներիայում:
