CrRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ crRNA-ն CRISPR-ի ՌՆԹ-ի երկու տեսակներից մեկն է, որը լրացնում է թիրախային ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը, մինչդեռ tracrRNA-ն CRISPR-ի ՌՆԹ-ի երկրորդ տեսակն է, որը ծառայում է որպես Cas նուկլեազի և gRNA-ի համար կապող փայտամածը CRISPR-Cas9 բակտերիաների և արխեայի համակարգի երկու հիմնական բաղադրիչներից մեկն է, որը ճանաչում է թիրախ ԴՆԹ-ն և ուղղորդում Cas սպիտակուցներին՝ թիրախ ԴՆԹ-ում կրկնակի շղթայական ճեղքեր կատարելու համար:
CRISPR-ը նշանակում է կլաստերային կանոնավոր ընդհատվող կարճ պալինդրոմային կրկնություններ: Այն բակտերիաների և արխեայի իմունային համակարգերից մեկն է: Բակտերիաները և արխեաները օգտագործում են այս համակարգը վիրուսային պաթոգեններից պաշտպանվելու համար:Դա ամենազարմանալի մեխանիզմներից մեկն է, որը ներառում է հաջող գենետիկ մոդիֆիկացում: Այս մեխանիզմը (CRISPR-Cas9) օգտագործվում է որպես կենսատեխնոլոգիայի գեների խմբագրման նոր գործիք: Այն նոր առաջընթաց է բերել բիոտեխնոլոգիային, հատկապես գենետիկ ինժեներիայի ոլորտում:
Կա CRISPR-Cas9 համակարգի երկու հիմնական բաղադրիչ: Դրանք ուղղորդող ՌՆԹ (gRNA) և CRISPR-ի հետ կապված (Cas) նուկլեազներ են։ Ուղեցույց ՌՆԹ-ն ՌՆԹ-ի հատուկ հաջորդականություն է, որն ուղղորդում է Cas սպիտակուցներին՝ ճեղքելու թիրախ ԴՆԹ-ն: Ուղղորդող ՌՆԹ-ն բաղկացած է երկու տեսակի ՌՆԹ-ից. Դրանք են՝ crispr RNA (crRNA) և tracrRNA: CRISPR-ի հետ կապված (Cas) նուկլեազները ոչ սպեցիֆիկ էնդոնուկլեազներ են, որոնք կատարում են թիրախային ԴՆԹ-ի երկշղթա ճեղքեր: Թիրախային ԴՆԹ-ում կրկնակի ճեղքեր կատարելով` բակտերիաները և արխեաները ուղղում են իրենց էնդոգեն վերականգնողական մեխանիզմները վիրուսային ԴՆԹ-ն ապաակտիվացնելուն:
Ի՞նչ է crRNA:
crRNA կամ Crispr RNA-ն ուղղորդող ՌՆԹ-ի երկու տեսակներից մեկն է: Կառուցվածքային առումով այն 17-20 նուկլեոտիդային հաջորդականություն է։ CrRNA-ի ամենաարժեքավոր առանձնահատկությունն այն է, որ այն լրացնում է թիրախային ԴՆԹ-ին:Հետևաբար, crRNA-ն համընկնում է վիրուսային ԴՆԹ-ի հաջորդականության հետ: CRISPR-Cas 9 համակարգի առանձնահատկությունը կախված է crRNA-ից: Բակտերիաներում crRNA-ն միաձուլված է tracrRNA հաջորդականությանը, որը CRISPR ՌՆԹ-ի երկրորդ տեսակն է: crRNA արտադրությունը հրահրվում է վիրուսի նկատմամբ բակտերիաների կրկնակի ենթարկվելու արդյունքում: Երբ ենթարկվում է, տեղի է ունենում crRNA-ն կոդավորող գենի տրանսկրիպցիան: Այնուհետև սկսվում է պաշտպանական մեխանիզմը վիրուսի դեմ։
Նկար 01. CRISPR-Cas9 համակարգ
Ի՞նչ է tracrRNA:
Տրանսակտիվացնող crRNA կամ tracrRNA-ն ուղեցույց ՌՆԹ-ի կամ CRISPR ՌՆԹ-ի երկրորդ մասն է: Այն արտասանվում է որպես հետագծող ՌՆԹ։ tracrRNA-ն ծառայում է որպես էնդոնուկլեազ Cas 9 սպիտակուցի կապող փայտամած: Այլ կերպ ասած, tracrRNA-ն աշխատում է որպես բռնակ՝ Cas9-ին ուղղորդելու դեպի թիրախ ԴՆԹ:Կառուցվածքային առումով tracrRNA-ն ունի 42 նուկլեոտիդ: Այն գոյություն ունի crRNA-ի հետ համակցված:
Ի՞նչ է gRNA:
Ուղեցույց ՌՆԹ-ն կամ gRNA-ն CRISPR-Cas9 իմունային համակարգի երկու հիմնական բաղադրիչներից մեկն է: Այն ՌՆԹ-ի հատուկ հաջորդականություն է՝ կազմված երկու տարրից՝ crRNA և tracrRNA: gRNA-ն ճանաչում է թիրախային ԴՆԹ-ն և ուղղորդում է Cas սպիտակուցներին թիրախային ԴՆԹ-ում կրկնակի շղթայական ճեղքեր ստեղծելու համար: Դա անելու համար crRNA-ն բաղկացած է թիրախային ԴՆԹ-ի լրացուցիչ հաջորդականությունից, մինչդեռ tracrRNA-ն առաջնորդում է Cas սպիտակուցները, որոնք աշխատում են որպես բռնակ:
Նկար 02. gRNA
Ճիշտ gRNA-ի նախագծումը կարևոր քայլ է CRISPR-Cas9 գեների խմբագրման գործիքում: Հետևաբար, CRISPR համակարգի հաջողությունը և խմբագրման արդյունավետությունը կախված են gRNA-ի ճիշտ հաջորդականությունից: gRNA-ն կարող է արտահայտվել փոխակերպված պլազմիդի բջիջներում:Երբ կլոնավորված պլազմիդները ներմուծվում են բջիջներ, ընդունող բջիջները առաջացնում են gRNA: Առավել հաճախ ստեղծվող gRNA-ն ներառում է 100 բազային զույգ։
Որո՞նք են նմանությունները crRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի միջև:
- crRNA, tracrRNA և gRNA-ն ՌՆԹ-ի հաջորդականություններ են, որոնք հայտնաբերված են բակտերիաներում և արխեաներում:
- Նրանք բոլորը պատկանում են CRISPR համակարգին:
- gRNA-ն պատրաստված է crRNA-ից և tracrRNA-ից:
- Նրանք ներգրավված են բակտերիոֆագի ԴՆԹ-ի ճանաչման և էնդոնուկլեազների ուղղորդման մեջ դեպի թիրախ ԴՆԹ:
- Հետևաբար, ՌՆԹ-ի բոլոր երեք տեսակները ներգրավված են Cas9 նուկլեազի ուղղորդման մեջ, որպեսզի ներխուժող օտար գենետիկ նյութերում կրկնակի շղթաներ կատարվեն:
- CRISPR փորձի հաջողությունը կախված է ՌՆԹ-ի բոլոր երեք տեսակներից:
Ո՞րն է տարբերությունը crRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի միջև:
crRNA-ն CRISPR-ի gRNA-ի մի մասն է, որը լրացնում է թիրախ ԴՆԹ-ին, մինչդեռ tracrRNA-ն gRNA-ի երկրորդ մասն է, որը ծառայում է որպես Cas նուկլեազի կապող փայտամած:gRNA-ն crRNA-ի և tracrRNA-ի համակցությունն է և այն CRISPR-Cas9 համակարգի երկու բաղադրիչներից մեկն է, որը ճանաչում է թիրախային ԴՆԹ-ն և ուղղորդում նուկլեազները՝ թիրախ ԴՆԹ-ում կրկնակի շղթայական ճեղքեր կատարելու համար: Այսպիսով, սա է crRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի հիմնական տարբերությունը:
Հետևյալ աղյուսակը ամփոփում է crRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի միջև եղած տարբերությունը:
Ամփոփում – crRNA vs tracrRNA vs gRNA
CRISPR-Cas9 համակարգը բակտերիաների և արխեաների իմունային համակարգ է: Այս համակարգը օգտագործվում է որպես կենսատեխնոլոգիայի գեների խմբագրման գործիք: CRISPR-ը բաղկացած է երկու տեսակի ՌՆԹ-ից՝ CRISPR RNA (crRNA) և transactivating CRISPR RNA (tracrRNA): Նրանք միասին հայտնի են որպես guideRNA կամ gRNA: Այս ՌՆԹ-ն ճանաչում է ներխուժող պաթոգենների թիրախային հաջորդականությունները և ուղղորդում էնդոնուկլեազներին՝ նպատակային ԴՆԹ-ում կրկնակի շղթաների ճեղքեր ստեղծելու համար: Օտար գենետիկական նյութում կրկնակի ճեղքերից հետո, էնդոգեն վերանորոգման մեխանիզմը (ոչ հոմոլոգիական վերջի միացում; NHEJ) ապաակտիվացնում է օտար ԴՆԹ-ն՝ ներմուծելով մուտացիաներ:Այսպիսով, սա ամփոփում է crRNA tracrRNA-ի և gRNA-ի միջև եղած տարբերությունը:
