Elisa-ի և Elispot-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ Elisa-ն ֆերմենտի հետ կապված իմունոսորբենտ է, որը որոշում է սեկրեցված ազդանշանային սպիտակուցների ընդհանուր կոնցենտրացիան, մինչդեռ Elispot-ը ֆերմենտի հետ կապված իմունոսորբենտ է, որը հայտնաբերում է առանձին ցիտոկիններ սեկրեցնող բջիջներ:
Elisa-ն և Elispot-ը երկու ֆերմենտային իմունոսորբենտային անալիզներ են, որոնք լայնորեն օգտագործվում են բժշկության, բույսերի պաթոլոգիայի, կենսատեխնոլոգիայի և տարբեր դեղագործական արդյունաբերության մեջ: Այս տեխնիկայում սպիտակուցային անալիտը հայտնաբերվում է դրա դեմ ուղղված հակամարմիններով: Elisa-ն լաբորատորիաներում օգտագործվող ամենահայտնի ֆերմենտային իմունոսորբենտ անալիզն է: Մյուս կողմից, Elispot-ը ֆերմենտների հետ կապված իմունոսորբենտ է, որը չի օգտագործվում Elisa-ի փոխարեն, այլ ավելի շուտ օգտագործվում է Elisa-ից բացի լաբորատորիաներում:
Ի՞նչ է Elisa Assay-ը:
Elisa-ն ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտ է, որը որոշում է սեկրեցված ազդանշանային սպիտակուցների ընդհանուր կոնցենտրացիան: Սա լայնորեն կիրառվող անալիտիկ կենսաքիմիական անալիզ է, որն առաջին անգամ նկարագրվել է Էնգվալի և Պերլմանի կողմից 1971 թվականին: Այս տեխնիկան օգտագործում է պինդ փուլային տեսակի ֆերմենտային իմունովերլուծություն՝ հայտնաբերելու հատուկ սպիտակուցի առկայությունը հեղուկ նմուշում՝ օգտագործելով հակամարմիններ, որոնք ուղղված են այս հատուկ սպիտակուցի դեմ: Այս վերլուծությունը բժշկության, բույսերի պաթոլոգիայի և կենսատեխնոլոգիայի մեջ սովորաբար օգտագործվող ախտորոշիչ գործիք է:
ELISA թեստի մեխանիզմ
ELISA թեստի մեծ մասում անհայտ քանակությամբ անտիգեն անշարժացվում է պինդ հենարանի (միկրոլիտրային ափսեի) սկզբում: Այնուհետև համապատասխան առաջնային հակամարմինը կիրառվում է ամուր աջակցության մակերեսի վրա: Այս հակամարմինը կազմում է մի համալիր հակագենի հետ (հակագին-հակամարմին համալիր): Հակագենով կապված առաջնային հակամարմինը կարող է հայտնաբերվել երկրորդային հակամարմինով, որը կապված է ֆերմենտի հետ կենսակոնյուգացիայի միջոցով:Elisa թեստի վերջնական փուլում ավելացվում է ֆերմենտի սուբստրատ պարունակող նյութ: Եթե կա առաջնային հակամարմինի պատշաճ կապակցում անտիգենին, ապա սուբստրատի կողմից առաջանում է նկատելի գունային փոփոխություն: Ի վերջո, սա քանակականացնում է նմուշի հակագենը:
Նկար 01. Էլիզայի տարբեր տեսակներ
Ավելին, Էլիզայի նկատմամբ կան տարբեր մոտեցումներ, ինչպիսիք են ուղղակի Էլիզային և անուղղակի Էլիզային: Ներկայումս Elisa-ի տարբեր թեստեր օգտագործվում են մարդու պաթոգենները հայտնաբերելու համար, ինչպիսիք են Mycobacterium tuberculosis-ը, ռոտավիրուսը, հեպատիտ B-ի վիրուսը, հեպատիտ C-ի վիրուսը, էնտերոտոքսին արտադրող E.coli-ն, ՄԻԱՎ-ը և SARS-CoV-2-ը::
Ի՞նչ է Elispot Assay-ը:
Elispot-ը ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտ է, որը հայտնաբերում է առանձին ցիտոկինային բջիջներ: Սեսիլ Չերկինսկին առաջին անգամ նկարագրել է ELISpot-ը 1983 թվականին։Դա վերլուծության տեսակ է, որը կենտրոնանում է մեկ բջջի համար ցիտոկինի սեկրեցիայի հաճախականության քանակական չափման վրա: Այն նաև դասակարգվում է որպես տեխնիկա, որն օգտագործում է հակամարմիններ՝ հայտնաբերելու կենսաբանական կամ քիմիական սպիտակուցային անալիտ: Fluorospot assay-ը Elispot վերլուծության տարբերակ է, որն օգտագործում է ֆլյուորեսցենտ՝ բազմաթիվ անալիտներ (ավելի գաղտնի սպիտակուցներ) վերլուծելու համար:
Elispot թեստի մեխանիզմ
Այս մեխանիզմում սկզբնական շրջանում միկրոլիտրային թիթեղների հորերին ավելացվում են ցիտոկինային հատուկ մոնոկլոնալ հակամարմիններ: Այնուհետև դիտվող ցանկալի բջիջները ավելացվում են հորերին: Հետագայում բջիջները ինկուբացվում են։ Բջջային ինկուբացիայի ընթացքում բջիջներին թույլատրվում է արձագանքել ցանկացած գրգռիչներին և արտազատել ցիտոկին: Ինկուբացված բջիջների կողմից արտազատված ցիտոկինները կկցվեն հակամարմիններին, քանի որ բջիջները շրջապատված են ցիտոկինային հատուկ մոնոկլոնալ հակամարմիններով:
Նկար 02. Էլիսպոտի վերլուծություն
Այս ցիտոկինային հատուկ մոնոկլոնալ հակամարմինները հայտնաբերելու համար հորին ավելացվում են բիոտինիլացված հատուկ հայտնաբերման հակամարմիններ: Բիոտինիլացված հատուկ հայտնաբերման հակամարմինները գրավում են հորերի ցիտոկինային հատուկ մոնոկլոնալ հակամարմինները: Ավելին, streptavidin-enzyme conjugates ավելացվում են հորեր, որպեսզի կապվեն հայտնաբերման հակամարմինների հետ: Վերջնական փուլում հորերին ավելացվում են հատուկ ենթաշերտեր: Ֆերմենտային կոնյուգատների և սուբստրատների ռեակցիաները հորերում առաջացնում են հստակ բծեր: Այս հստակ կետերը կարդացվում են ավտոմատացված ELISpot ընթերցողի վրա: Ի վերջո, սա հետագայում կհաշվի ցիտոկինի սեկրեցիայի հաճախականությունը:
Որո՞նք են նմանությունները Elisa-ի և Elispot-ի միջև:
- Դրանք երկուսն էլ ֆերմենտային կապված իմունոսորբենտային անալիզներ են:
- Երկու անալիզները հայտնաբերում են հատուկ սպիտակուցային անալիտներ:
- Այս անալիզները օգտագործում են հատուկ հակամարմիններ՝ սպիտակուցային անալիտները բացահայտելու համար:
- Երկու անալիզներն էլ օգտագործում են ֆերմենտներ և սուբստրատներ:
- Դրանք օգտագործվում են որպես ախտորոշիչ գործիք բժշկական լաբորատորիաներում։
Ո՞րն է տարբերությունը Էլիզայի և Էլիսփոթի միջև:
Elisa-ն ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտ է, որը որոշում է սեկրեցված ազդանշանային սպիտակուցների ընդհանուր կոնցենտրացիան: Մյուս կողմից, Elispot-ը ֆերմենտի հետ կապված իմունոսորբենտ է, որը չափում է առանձին ցիտոկինային սեկրեցնող բջիջները: Այսպիսով, սա Էլիզայի և Էլիսպոտի հիմնական տարբերությունն է: Ավելին, Elisa թեստի ժամանակ անտիգենը նախ անշարժացվում է միկրոլիտրային հորերի վրա: Ի հակադրություն, Elispot թեստի ժամանակ հակամարմինը նախ անշարժացվում է միկրոլիտրային հորերի վրա: Այսպիսով, սա ևս մեկ տարբերություն է Էլիզայի և Էլիսփոտի միջև:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ներկայացնում է Elisa-ի և Elispot-ի միջև տարբերության մանրամասն վերլուծությունը աղյուսակային տեսքով:
Ամփոփում – Էլիզան ընդդեմ Էլիսպոտի
Elisa-ն և Elispot-ը երկու ֆերմենտային իմունոսորբենտային անալիզներ են, որոնք լայնորեն օգտագործվում են բժշկության, բույսերի պաթոլոգիայի, կենսատեխնոլոգիայի և տարբեր դեղագործական արդյունաբերության մեջ: Elisa-ն հայտնաբերում է լիգանդի (սպիտակուցի) առկայությունը հեղուկ նմուշում՝ օգտագործելով չափվող լիգանդի դեմ ուղղված հակամարմինները: Elispot վերլուծությունը լայնորեն օգտագործվող մեթոդ է իմունային պատասխանների մոնիտորինգի համար: Այն հայտնաբերում է առանձին ցիտոկինային բջիջներ՝ օգտագործելով հակամարմիններ: Դա և՛ իմունային, և՛ բիովերլուծության տեխնիկա է: Այսպիսով, սա Էլիզայի և Էլիսփոտի միջև եղած տարբերության ամփոփումն է։
