Klenow հատվածի և ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ Klenow բեկորը ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեծ մասն է, որը չունի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, մինչդեռ ԴՆԹ պոլիմերազը E. coli-ի ֆերմենտ է, որն ունի բոլոր երեքը: տիրույթներ, ներառյալ 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը:
ԴՆԹ պոլիմերազը կենդանի օրգանիզմներում ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ ներգրավված հիմնական ֆերմենտներից մեկն է: Գոյություն ունեն ԴՆԹ պոլիմերազային ֆերմենտի տարբեր ձևեր, որոնք հայտնաբերված են էուկարիոտներում և պրոկարիոտներում՝ կախված չափից և ձևից: ԴՆԹ պոլիմերազ 1, 2 և 3 հանդիպում են միայն պրոկարիոտ օրգանիզմներում, և նրանք տարբեր դերեր են խաղում ԴՆԹ-ի վերարտադրության մեջ։ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ն ունի երեք տիրույթ՝ 5'-ից 3' պոլիմերազային, 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային ակտիվությամբ և 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվությամբ: Կլենոուի բեկորը ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի պրոտեոլիտիկ արտադրանք է: Այն ունի անձեռնմխելի ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի 5-ից 3' պոլիմերազային և 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, սակայն չունի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն::
Ի՞նչ է Klenow Fragment-ը:
Klenow բեկորը ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեծ մասն է: Ի տարբերություն ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի, 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն չի նկատվում Klenow-ի հատվածում, քանի որ այն չունի 5'-ից 3' առաջ էկզոնուկլեազային տիրույթ: Klenow-ի բեկորներն արտադրվում են ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ը մարսելով պրոտեազով, որը կոչվում է սուբտիլիսին, որը սպիտակուցը մարսող ֆերմենտ է: Որոշ կիրառություններում Klenow հատվածի 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը դառնում է անցանկալի: Այն կարելի է հեռացնել՝ ներմուծելով գենի մուտացիա, որը կոդավորում է Կլենոուի հատվածը։ Ստացված ֆերմենտը, որն ունի միայն 5'-ից 3' պոլիմերազային ակտիվություն, հայտնի է որպես էկզո-Կլենովի բեկոր:Մորֆոլոգիապես Կլենոուի հատվածը նման է մարդու աջ ձեռքին։ Այն ունի N-տերմինալ 3'-5' էկզոնուկլեազային տիրույթ և C-տերմինալ պոլիմերազային տիրույթ՝ առանձնացված մոտ 30 Ա-ով։
Նկար 01. Klenow Fragment և ԴՆԹ պոլիմերազ 1
Klenow բեկորը կարևոր գործիք է մոլեկուլային կենսաբանական տեխնիկայում: Klenow-ի բեկորները բազմաթիվ կիրառումներ ունեն: Դրանք չափազանց կարևոր են բութ կլոնավորման համար՝ բութ բեկորներ ստանալու համար: Klenow-ի բեկորները կարող են հեռացնել 3′ ելուստները կամ լրացնել 5′ ծայրերը՝ բութ ծայրեր կազմելու համար: Ավելին, Կլենոուի բեկորներն օգտագործվում են միայնակ շղթաներից երկշղթա ԴՆԹ սինթեզելու համար։ Ավելին, դրանք օգտագործվում են ռադիոակտիվ պիտակավորված զոնդերի պատրաստման համար՝ օգտագործելով 5'-ից 3' ԴՆԹ-ից կախված ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվությունը:
Ի՞նչ է ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ը:
ԴՆԹ պոլիմերազ 1 (Pol 1) պրոկարիոտներում հայտնաբերված ֆերմենտ է, որն անհրաժեշտ է բակտերիալ ԴՆԹ-ի վերարտադրության համար: Դա ԴՆԹ պոլիմերազի առաջին տեսակն է, որը հայտնաբերվել է Արթուր Կոռնբերգի կողմից 1956 թվականին: Pol 1-ն ամենաառատ պոլիմերազն է E. coli-ում: Այն կոդավորված է polA գենով և կազմված է 928 ամինաթթուներից։ Այն բաղկացած է երեք տիրույթից. Բոլոր երեք տիրույթները կատարում են հստակ գործառույթներ: Երկու տիրույթ իրականացնում են 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն և 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Պոլ 1-ի այս ակտիվության շնորհիվ այն հայտնի է որպես ԴՆԹ վերականգնող ֆերմենտ, այլ ոչ թե ԴՆԹ-ի վերարտադրող ֆերմենտ: Երրորդ տիրույթը հնարավորություն ունի կատալիզացնելու բազմաթիվ պոլիմերացումներ (5'-ից 3') մինչև կաղապարի ԴՆԹ-ի թողարկումը և Okazaki-ի բեկորները իրար միացնելը՝ նոր ԴՆԹ-ն լցնելով և ՌՆԹ պրայմերները հեռացնելով:
Նկար 02. ԴՆԹ պոլիմերազ
E Coli-ից մեկուսացված Pol 1-ը լայնորեն օգտագործվում էր մոլեկուլային կիրառություններում: Այնուամենայնիվ, Taq Polymerase-ի հայտնաբերումից հետո այն փոխարինեց E Coli Pol 1-ին PCR տեխնոլոգիայի մեջ: Taq պոլիմերազը մի տեսակ ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազ է, որը պատկանում է Pol 1-ին։
Որո՞նք են նմանությունները Klenow Fragment-ի և DNA Polymerase 1-ի միջև:
- Klenow բեկորը ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեծ մասն է:
- Նրանք ունեն 5'-ից 3' ԴՆԹ-ից կախված ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվություն և 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, որը միջնորդում է սրբագրմանը:
- Դրանք օգտագործվում են բազմաթիվ նպատակների համար:
Ո՞րն է տարբերությունը Klenow Fragment-ի և ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի միջև:
Կլենոուի ֆրագմենտի և ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ Կլենոուի հատվածը չունի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, մինչդեռ ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ն ունի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Հետևաբար, Klenow բեկորն ունի երկու տիրույթ, մինչդեռ ԴՆԹ պոլիմերազա 1-ն ունի բոլոր երեք տիրույթները:
Ստորև ինֆոգրաֆիկայում ցուցադրվում են Klenow բեկորի և ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի տարբերության ավելի շատ մանրամասներ:
Ամփոփում – Klenow Fragment vs DNA Polymerase 1
ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ը E. coli-ի ֆերմենտ է, որն ունի երեք տիրույթ՝ որպես 5'-ից 3' պոլիմերացման տիրույթ, 3'-ից 5' էկզոնուկլեազային տիրույթ և 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային տիրույթ: Klenow բեկորը ԴՆԹ պոլիմերազի մեծ մասն է: Նրան բացակայում է ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեկ տիրույթ, որը 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային տիրույթն է: Klenow հատվածի և ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ Klenow բեկորները չունեն 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային տիրույթ, մինչդեռ ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ն ունի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային տիրույթ::
