Հիմնական տարբերություն – ԴՆԹ-ի ընդդեմ ՌՆԹ-ի արդյունահանման
ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի ուսումնասիրությունը կենսական ասպեկտներ են՝ մոլեկուլային կենսաբանության, կենսատեխնոլոգիայի և գենետիկայի հիմնական հասկացությունները հասկանալու համար: Մաքուր ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի նմուշների արդյունահանումն անհրաժեշտ է այս ուսումնասիրությունների ընթացքում փորձարարական ընթացակարգեր իրականացնելու համար: ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանման հիմնական տարբերությունն այն է, որ ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացը մաքրում է ԴՆԹ-ն, մինչդեռ ՌՆԹ-ի արդյունահանումը մաքրում է ՌՆԹ-ն: ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացն ունի երեք տարբեր փուլ՝ բջիջների լիզում և թաղանթային լիպիդների և սպիտակուցների կատաբոլիզմ, կատաբոլիտների կուտակում խտացված աղի լուծույթով և ԴՆԹ-ի նստեցում էթանոլով:Երեք քայլ ընթացակարգը կարող է բաղկացած լինել երկու կամընտիր քայլից: ՌՆԹ-ի մաքրման գործընթացը բաղկացած է չորս տարբեր փուլերից՝ գուանիդիումի թիոցիանատի ավելացում՝ բջիջների լիզման համար, սպիտակուցի դենատուրացիա՝ ներառյալ ռիբոնուկլեազները, ՌՆԹ-ի տարանջատում քլորոֆորմի և ֆենոլի ավելացմամբ և նստվածքի լվացում էթանոլի միջոցով:
Ի՞նչ է ԴՆԹ-ի արդյունահանումը:
ԴՆԹ-ի արդյունահանումը ֆիզիկական և քիմիական գործընթաց է, որն օգտագործվում է նմուշից ԴՆԹ-ի մաքրման համար: ԴՆԹ-ի արդյունահանումը կարևոր ասպեկտ է մոլեկուլային կենսաբանության և դատաբժշկական գիտությունների համատեքստում: Գործընթացը բաղկացած է երեք հիմնական քայլերից. Սկզբում պետք է ձեռք բերել հետաքրքրության բջիջները: Այնուհետև բջիջների լիզը հեշտացվում է, որպեսզի կոտրվի բջջային թաղանթը, որը բացում է բջիջը և բացահայտում ցիտոպլազմը ԴՆԹ-ի հետ միասին: Մակերեւութային ակտիվ նյութերը կամ այլ լվացող միջոցները կարող են օգտագործվել բջջային թաղանթից լիպիդները լուծարելու համար, մինչդեռ առկա սպիտակուցները կատաբոլիզացվում են պրոթեզերոններով: Սա ընտրովի քայլ է: Բջիջը լուծվելուց հետո կատաբոլացված մոլեկուլների կուտակումը հեշտանում է աղի խտացված լուծույթների միջոցով:Դրան հաջորդում է լուծույթի ցենտրիֆուգացումը, որը բաժանում է բեկորների կուտակումները ԴՆԹ-ից: Այս փուլում տարբերակված ԴՆԹ-ն խառնվում է բջջային ցիկլի ընթացքում օգտագործվող ռեակտիվների և աղերի հետ։
Նկար 01. ԴՆԹ արդյունահանում
Այն հետագա մաքրման համար կարող են օգտագործվել հետևյալ քայլերը. Մեթոդներից մեկը էթանոլային տեղումներն է, որը ներառում է սառցե սառը էթանոլի խառնումը տարանջատված ԴՆԹ նմուշի հետ: ԴՆԹ-ն անլուծելի է սպիրտի մեջ և դրանով իսկ առաջացնում է կարկուտ ԴՆԹ-ի մոլեկուլների միավորման պատճառով: Նատրիումի ացետատը ավելացվում է այս գործընթացում՝ տեղումների աստիճանը բարձրացնելու համար՝ մեծացնելով իոնային ուժը: Ի լրումն էթանոլային տեղումների գործընթացի, դրա համար կարող է առաջանալ նաև ֆենոլ-քլորոֆորմի արդյունահանման գործընթաց: Այս մեթոդով ֆենոլը դենատուրացիա է անում նմուշում առկա սպիտակուցները:Ցենտրիֆուգից հետո դենատուրացված սպիտակուցները կմնան օրգանական փուլում, մինչդեռ քլորոֆորմի հետ խառնված ԴՆԹ մոլեկուլները ներկա կլինեն ջրային փուլում: Քլորոֆորմը կհեռացնի ֆենոլի մնացորդները։ Արդյունահանումն ավարտվելուց հետո ԴՆԹ-ն լուծված է պահվում TE բուֆերի կամ ծայրահեղ մաքուր ջրի մեջ։
Ի՞նչ է ՌՆԹ-ի արդյունահանումը:
ՌՆԹ-ի մաքրումը գործընթաց է, որով ՌՆԹ-ն մաքրվում է կենսաբանական նմուշից: Բջիջներում և հյուսվածքներում ռիբոնուկլեազի առկայության պատճառով այս գործընթացը բարդանում է։ Ռիբոնուկլեազ ֆերմենտը ՌՆԹ-ն արագ քայքայելու հատկություն ունի։ Ռիբոնուկլեազների քիմիական բնույթը չափազանց կայուն է, և դժվար է դրանք ապաակտիվացնել: Ռիբոնուկլեազների չեզոքացումը տարբերակ է: Քանի որ այս ֆերմենտը ամենուր տարածված է բջիջներում և հյուսվածքներում, հատուկ տեխնիկա են մշակվել ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար: Բազմաթիվ մեթոդներից ընդհանուր մեթոդը գուանիդինիումի թիոցինատ-ֆենոլ-քլորոֆորմի արդյունահանումն է:
Նկար 02. ՌՆԹ-ի արդյունահանում
Գուանիդինիումի թիոցինատ-ֆենոլ-քլորոֆորմ արդյունահանման մեթոդը կախված է ցենտրիֆուգումից և փուլային տարանջատումից: Ցենտրիֆուգման ենթակա խառնուրդը բաղկացած է ջրային նմուշից և ջրով հագեցած լուծույթից, որը բաղկացած է ֆենոլից և քլորոֆորմից: Ցենտրիֆուգից հետո լուծույթը բաղկացած է վերին ջրային և ստորին օրգանական փուլից չեզոք pH պայմաններում (pH 7-8): ՌՆԹ-ն առկա է ջրային փուլում: Օրգանական փուլը սովորաբար բաղկացած է ֆենոլում լուծված սպիտակուցներից և քլորոֆորմում լուծված լիպիդներից: Ավելացվում է քաոտրոպ նյութ (մոլեկուլ, որն ունի ջրի մոլեկուլների միջև ջրածնային կապերը կոտրելու հատկություն); սա հայտնի է որպես գուանիդինի թիոցիանատ: Այս գործակալն ունի սպիտակուցներ, որոնք ներառում են ռիբոնուկլեազներ, որոնք կարող են քայքայել ՌՆԹ-ն և ներգրավված են բջիջների լիզման մեջ, դենուրացիայի ենթարկելու հատկություն ունի: Այն նաև առանձնացնում է rRNA-ն ռիբոսոմային սպիտակուցներից։ՌՆԹ-ի մաքրման վերջին քայլը ջրային փուլի նստվածքները էթանոլով լվանալն է: ՌՆԹ-ն կարող է նաև մաքրվել հեղուկ ազոտի միջոցով։
Որո՞նք են նմանությունները ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանման միջև:
- Երկու արդյունահանման գործընթացներում օգտագործվում են վնասակար քիմիական նյութեր, ինչպիսիք են ֆենոլը և քլորոֆորմը:
- Ցենտրիֆուգացումը կարևոր տեխնիկա է երկու գործընթացների համար:
- Էթանոլն օգտագործվում է նստվածքը լվանալու և մաքրված ԴՆԹ կամ ՌՆԹ ստանալու համար:
Ո՞րն է տարբերությունը ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանման միջև:
ԴՆԹ ընդդեմ ՌՆԹ-ի արդյունահանման |
|
| ԴՆԹ-ի արդյունահանումը գործընթաց է, որն օրգանիզմից կամ նմուշից դուրս է բերում ԴՆԹ: | ՌՆԹ-ի արդյունահանումը գործընթաց է, որը նմուշից հանում է ՌՆԹ: |
| Քայլեր | |
| ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացը բաղկացած է երեք տարբեր փուլերից՝ երկու ընտրովի քայլերով: | ՌՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացը բաղկացած է չորս տարբեր փուլերից: |
| Ռեագենտներ | |
| Մակերեւութային ակտիվ նյութեր, պրոթեզերներ (ըստ ցանկության), ալկոհոլ, քլորոֆորմ, ֆենոլ, նատրիումի ացետատ օգտագործվում են ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար: | Գուանիդիումի թիոցիանատ, քլորոֆորմ, ֆենոլ, էթանոլ օգտագործվում են ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար: |
Ամփոփում – ԴՆԹ ընդդեմ ՌՆԹ-ի արդյունահանման
ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանումը մոլեկուլային կենսաբանության, գենետիկայի և կենսատեխնոլոգիայի ուսումնասիրության փորձարարական ընթացակարգերի կենսական ասպեկտներն են: Երկու գործընթացներն էլ ներառում են նմանատիպ ռեակտիվներ, սակայն ՌՆԹ-ի արդյունահանումը օգտագործում է հատուկ ռեագենտ, որը հայտնի է որպես Guanidium thiocyanate, որը նվազեցնում է ռիբոնուկլեազների ակտիվությունը:Սա ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանման հիմնական տարբերությունն է:
Ներբեռնեք ԴՆԹ-ի PDF տարբերակը ընդդեմ ՌՆԹ-ի արդյունահանման
Դուք կարող եք ներբեռնել այս հոդվածի PDF տարբերակը և օգտագործել այն անցանց նպատակներով՝ ըստ մեջբերումների: Խնդրում ենք ներբեռնել PDF տարբերակը այստեղ Տարբերությունը ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի արդյունահանման միջև
