Ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի հիմնական տարբերությունն այն է, որ ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզում օգտագործվում են հորիզոնական լցված ագարոզային գելեր՝ ԴՆԹ-ի համեմատաբար ավելի մեծ բեկորները առանձնացնելու համար, մինչդեռ պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզում օգտագործում են ուղղահայաց թափված պոլիակրիլամիդ գելեր՝ ավելի կարճ նուկլեինաթթվի բեկորները բաժանելու համար:
Էլեկտրոֆորեզը տեխնիկայի տեսակ է, որն օգտագործում է էլեկտրական դաշտը, որը կիրառվում է գելային մատրիցով, որպեսզի առանձնացնի կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները: Կենսամոլեկուլների այս տարանջատումը, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները, էլեկտրաֆորեզի միջոցով հիմնված է լիցքի և չափի վրա:Նմուշները բեռնվում են գելի հորերի մեջ: Հետագայում էլեկտրական դաշտը կիրառվում է գելի վրա: Դաշտը հանգեցնում է նրան, որ բացասական լիցքավորված մոլեկուլները շարժվում են դեպի դրական էլեկտրոդ: Գելային մատրիցը գործում է որպես մոլեկուլային մաղ, որի միջով ամենափոքր մոլեկուլներն անցնում են կամ արագ շարժվում, մինչդեռ ավելի մեծ մոլեկուլները դանդաղ են շարժվում: Սա հնարավորություն է տալիս բաժանել մոլեկուլները՝ հիմնվելով լիցքի և չափի վրա: Հետևաբար, ագարոզա և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը գելային էլեկտրոֆորեզի երկու տեսակի մեթոդներ են, որոնք հիմնականում օգնում են առանձնացնել մոլեկուլները՝ ելնելով դրանց չափից և լիցքից:
Ի՞նչ է ագարոզայի գել էլեկտրոֆորեզը:
Ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզը տեխնիկա է, որն օգտագործում է ագարոզայի գելեր՝ առանձնացնելու այնպիսի կենսամոլեկուլներ, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն: Դա տեխնիկա է, որն օգտագործվում է նուկլեինաթթուները հիմնականում ըստ չափի առանձնացնելու համար: Այս տեխնիկայում օգտագործվող ագարոզ կոչվող հիմնական միացությունը պոլիսախարիդ է: Այն գալիս է ջրիմուռներից: Ագարոզը կարող է լուծվել եռացող բուֆերի մեջ, այնուհետև այն լցնել սկուտեղի մեջ, որը պահվում է հորիզոնական:Սկուտեղի մեջ այն ամրանում է, երբ սառչում է, ձևավորելով սալաքար: Ագարոզայի գելերը լցնում են սանրով, որպեսզի հորեր ստեղծվեն, որոնց մեջ ներբեռնվում են նուկլեինաթթուներ, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն կամ ՌՆԹ-ն, երբ գելը կարծրանա:
Նկար 01. Ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզ
Գելը հետագայում ընկղմվում է համապատասխան բուֆերի մեջ և հոսանք է կիրառվում գելի վրա: ԴՆԹ-ն ունի միատեսակ բացասական լիցք, որը անկախ է մոլեկուլի հաջորդական կազմից: Հետևաբար, ԴՆԹ-ի մոլեկուլները կաթոդից (-) կտեղափոխվեն դեպի անոդ (+): Միգրացիայի արագությունը ուղղակիորեն կախված է մոլեկուլի չափից: Ամենամեծ մակրոմոլեկուլները ամենադժվարն են նավարկում գելի միջով: Մյուս կողմից, ավելի փոքր մակրոմոլեկուլները արագ և հեշտությամբ սահում են գելի միջով:
Ի՞նչ է պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը:
Պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը (PAGE) տեխնիկա է, որն օգտագործում է պոլիակրիլամիդ գելեր՝ կենսամոլեկուլները առանձնացնելու համար: Սա տեխնիկա է, որը լայնորեն օգտագործվում է կենսաբանական մակրոմոլեկուլների, սովորաբար սպիտակուցների և նուկլեինաթթուների առանձնացման համար՝ ըստ նրանց էլեկտրաֆորետիկ շարժունակության։ Ակրիլոնիտրիլի խոնավացումը հանգեցնում է ակրիլամիդի մոլեկուլների ձևավորմանը նիտրիլ հիդրատազի կողմից: Ակրիլամիդը լուծելի է ջրում, և ազատ ռադիկալների նախաձեռնող նյութերի ավելացման դեպքում ակրիլամիդը պոլիմերացվում է, ինչի արդյունքում ձևավորվում է պոլիակրիլամիդ գել: Սովորաբար, ակրիլամիդի կոնցենտրացիայի ավելացումը հանգեցնում է գելի ծակոտիների նվազմանը: Պոլիակրիլամիդ գելերը լցվում են ուղղահայաց՝ ի տարբերություն ագարոզայի գելերի։
Գծապատկեր 02. պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզ
Պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզում մոլեկուլները կարող են աշխատել իրենց բնածին վիճակում՝ պահպանելով մոլեկուլների ավելի բարձր կարգի կառուցվածքը: Այս մեթոդը կոչվում է բնիկ PAGE: Որպես այլընտրանք, կարող է ավելացվել նաև քիմիական denaturant՝ հեռացնելու ավելի բարձր կարգի կառուցվածքը և մոլեկուլը վերածել չկառուցված մոլեկուլի, որի շարժունակությունը կախված է միայն երկարությունից: Այս տեսակը կոչվում է SDS-PAGE:
Որո՞նք են նմանությունները ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի միջև:
- Ագարոզա և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը գելային էլեկտրոֆորեզի երկու տեսակի տեխնիկա են:
- Իրականում դրանք մոլեկուլային կենսաբանական տեխնիկա են:
- Երկու տեխնիկան էլ օգտագործվում են կենսաբանական մակրոմոլեկուլների հայտնաբերման համար, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն և սպիտակուցները:
- Այս տեխնիկան կատարվում է հմուտ տեխնիկների կամ հետազոտողների կողմից:
- Երկու տեխնիկայում էլ մակրոմոլեկուլների բաժանումը հիմնված է լիցքի և չափի վրա։
- Երկու տեխնիկան էլ թույլ է տալիս տարանջատել նուկլեինաթթուներ, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն:
Ո՞րն է տարբերությունը ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գելի էլեկտրոֆորեզի միջև:
Ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզը տեխնիկա է, որն օգտագործում է հորիզոնական թափվող ագարոզայի գելեր՝ բիոմոլեկուլները առանձնացնելու համար, մինչդեռ պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը տեխնիկա է, որն օգտագործում է ուղղահայաց թափվող պոլիակրիլամիդ գելեր՝ բիոմոլեկուլները առանձնացնելու համար: Սա ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզի հիմնական տարբերությունն է: Ավելին, ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզը օգտագործվում է ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի տարանջատման համար, մինչդեռ պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը օգտագործվում է նուկլեինաթթուների, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն կամ սպիտակուցները բաժանելու համար:
Հետևյալ աղյուսակը ամփոփում է ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի տարբերությունը:
Ամփոփում – Ագարոզա ընդդեմ պոլիակրիլամիդ գելի էլեկտրոֆորեզ
Ագարոզա և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզը գելային էլեկտրոֆորեզի երկու տեսակի տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են մոլեկուլային կենսաբանության լաբորատորիաներում:Ագարոզայի գել էլեկտրոֆորեզում օգտագործվում է ագարոզայի գել՝ կենսամոլեկուլները առանձնացնելու համար: Ագարոզը, ընդհանուր առմամբ, թունավոր չէ մարդկանց համար, մինչդեռ պոլիակրիլամիդը թունավոր է մարդկանց համար: Ավելին, ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզը ցույց է տալիս ցածր լուծույթ, մինչդեռ պոլիակրիլամիդային գել էլեկտրոֆորեզը ցույց է տալիս ավելի շատ լուծում: Պոլիակրիլամիդ գել էլեկտրոֆորեզում օգտագործվում է պոլիակրիլամիդ գել՝ բիոմոլեկուլները առանձնացնելու համար: Սա ամփոփում է ագարոզայի և պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզի տարբերությունը
