BL21-ի և DH5 Alpha-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ BL21-ը պրոթեզերոնի պակասով գենետիկորեն մշակված իրավասու E. coli բջիջ է, որն օգտագործվում է հիմնականում սպիտակուցի արտահայտման համար, մինչդեռ DH5 Alpha-ն գենետիկորեն մշակված իրավասու E. coli բջիջ է, որն օգտագործվում է հիմնականում recA1 մուտացիայով: պլազմիդային փոխակերպման համար։
E. coli-ն ռեկոմբինանտ սպիտակուցի արտադրության համար ընտրված հայտնի օրգանիզմներից է: Այն տարիների ընթացքում դարձել է արտահայտման ամենատարածված հարթակը: Օգտագործվում է նաև որպես բջջային գործարան։ BL21-ը և DH5 Alpha-ն գենետիկորեն մշակված երկու E. coli բջիջներ են, որոնք ներկայումս օգտագործվում են համապատասխանաբար սպիտակուցների արտահայտման և պլազմիդի փոխակերպման համար:
Ինչ է BL21?
BL21-ը պրոթեզերոնի պակասով գենետիկորեն մշակված իրավասու E.coli բջիջ է, որը հիմնականում օգտագործվում է սպիտակուցի արտահայտման համար: E. coli BL21-ը բակտերիալ բջիջ է, որը ստացվում է B շտամից: Այն ունի Lon պրոթեզերոնի և ompT արտաքին թաղանթային պրոտեազի թերություններ: Այն սովորաբար օգտագործվում է ռեկոմբինանտ սպիտակուցի արտահայտման համար, քանի որ այն սովորաբար կայունություն է հաղորդում արտահայտված սպիտակուցներին: BL21-ը օգտակար է pCold I-IV ԴՆԹ-ով և pCold TF ԴՆԹ-ով սպիտակուցային արտահայտման համար: Բայց այս իրավասու E. coli բջիջը նախատեսված չէ սպիտակուցային արտահայտման համակարգի համար, որն օգտագործում է T7 խթանող, ինչպիսին է pET համակարգը: Պատճառն այն է, որ BL21-ը չի արտահայտում T7 RNA պոլիմերազը: Բացի այդ, խորհուրդ չի տրվում օգտագործել պլազմիդի կառուցման կամ պատրաստման համար, քանի որ այն չունի recA մուտացիա:
Նկար 01. BL21
BL21-ն առաջին անգամ նկարագրվել է Studier-ի կողմից 1986 թվականին՝ B տողի տարբեր փոփոխություններից հետո: BL21 բջիջները ունեն LON պրոթեզերոնի պակաս, որը քայքայում է շատ օտար սպիտակուցներ: Ավելին, նրան բացակայում է ևս մեկ գեն, որը կոդավորում է արտաքին թաղանթային պրոտեազը (OmpT), որի գործառույթը արտաբջջային սպիտակուցների քայքայումն է: Այս սպիտակուցների պակասը խթանում է E. coli BL21 բջիջներում օտար սպիտակուցի հաջող արտադրությունը: Ավելին, այս բջիջներում hsdSB մուտացիան կանխում է օտար ԴՆԹ-ի մեթիլացումը և խանգարումը BL21 բջիջներում:
Ի՞նչ է DH5 Alpha:
DH5 Alpha-ն գենետիկորեն մշակված իրավասու E. coli բջիջ է recA1 մուտացիայով, որը հիմնականում օգտագործվում է պլազմիդային փոխակերպման համար: DH5 Alpha E. coli բջիջները գենետիկորեն մշակվել են ամերիկացի կենսաբան Դուգլաս Հանահանի կողմից՝ առավելագույնի հասցնելու փոխակերպման արդյունավետությունը: DH5 ալֆա բջիջն ունի երեք հստակ մուտացիա՝ recA1, endA1 և lacZΔM15: recA1-ը մեկ կետային մուտացիա է, որը փոխարինում է գլիցին 160-ին և ասպարտաթթվի մնացորդով recA պոլիպեպտիդում:Այս մուտացիան անջատում է ռեկոմբինազների ակտիվությունը և ապաակտիվացնում հոմոլոգ ռեկոմբինացիան։ endA1 մուտացիան ապաակտիվացնում է ներբջջային էնդոնուկլեազը, ինչը թույլ չի տալիս այն քայքայել տեղադրված պլազմիդը:
Նկար 02. DH5 ալֆա
Ավելին, lacZΔM15 մուտացիան թույլ է տալիս վերափոխված բջիջների կապույտ-սպիտակ ցուցադրումը: Այս բջիջները իրավասու բջիջներ են: Դրանք հաճախ օգտագործվում են կալցիումի քլորիդի փոխակերպման հետ՝ ցանկալի պլազմիդը տեղադրելու համար: Վերջին հետազոտությունների արդյունքում պարզվել է, որ Hanahan մեթոդով DH5 ալֆա բջիջը պլազմիդների փոխակերպման ամենաարդյունավետ բջիջն էր:
Որո՞նք են նմանությունները BL21-ի և DH5 Alpha-ի միջև:
- BL21 և DH5 Alpha երկու գենետիկորեն մշակված E.coli
- Երկուսն էլ իրավասու բջիջներ են։
- Դրանք բաղկացած են հստակ մուտացիաներից:
- Երկուսն էլ բնական միջավայր չունեն։
- Սրանք օգտագործվում են լաբորատոր նպատակների համար, ինչպիսիք են արտահայտչական ուսումնասիրությունները և կլոնավորման ընթացակարգերը:
Ո՞րն է տարբերությունը BL21-ի և DH5 Alpha-ի միջև:
BL21-ը պրոթեզերոնի պակասով գենետիկորեն մշակված իրավասու E. coli բջիջ է, որն օգտագործվում է հիմնականում սպիտակուցի արտահայտման համար: Մյուս կողմից, DH5 Alpha-ն գենետիկորեն մշակված իրավասու E. coli բջիջ է recA1 մուտացիայով, որը հիմնականում օգտագործվում է պլազմիդային փոխակերպման համար: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է BL21-ի և DH5 Alpha-ի միջև: Ավելին, BL21 E. coli բջիջը չունի recA1 մուտացիա, մինչդեռ DH5 Alpha E. coli բջիջը ունի recA1 մուտացիա:
Հետևյալ ինֆոգրաֆիկան ցույց է տալիս BL21-ի և DH5 Alpha-ի տարբերությունները աղյուսակային տեսքով:
Ամփոփում – BL21 vs DH5 Alpha
E. coli-ի ոչ ախտածին շտամները գենետիկորեն մշակվել են գիտնականների կողմից՝ լաբորատոր էքսպրեսիայի ուսումնասիրությունների և կլոնավորման նպատակով:BL21-ը և DH5 Alpha-ն գենետիկորեն մշակված երկու E. coli բջիջներ են: BL21-ը հիմնականում օգտագործվում է սպիտակուցի արտահայտման ուսումնասիրությունների համար: Մյուս կողմից, DH5 Alpha-ն հիմնականում օգտագործվում է պլազմիդային փոխակերպման նպատակներով: Այսպիսով, սա BL21-ի և DH5 Alpha-ի միջև տարբերության ամփոփումն է:
