Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի հիմնական տարբերությունն այն է, որ Klenow բեկորը E. coli ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեծ բեկոր է, մինչդեռ T4 ԴՆԹ պոլիմերազը բակտերիոֆագ T4-ի ԴՆԹ պոլիմերազա 1 է:
ԴՆԹ պոլիմերազները ֆերմենտներ են, որոնք կատալիզացնում են ԴՆԹ-ի ձևավորումը՝ նախապես գոյություն ունեցող այբբենարանի 3'-OH ծայրին ավելացնելով դեզօքսիրիբոնուկլեոտիդներ։ Կան ԴՆԹ պոլիմերազների տարբեր տեսակներ: Մոլեկուլային կենսաբանության մեջ օգտագործվող ԴՆԹ պոլիմերազների մեծ մասը պրոկարիոտ ԴՆԹ պոլիմերազներ են։ Klenow բեկորը և T4 ԴՆԹ պոլիմերազը երկու տեսակի ԴՆԹ պոլիմերազներ են, որոնք ունեն պրոկարիոտ ծագում: Կլենովի բեկորն այն մեծ բեկորն է, որն առաջանում է E-ի ճեղքվածքից։coli-ի ԴՆԹ պոլիմերազա 1-ը բակտերիալ պրոտեազային սուբտիլիսինի միջոցով վերածվել է երկու հատվածի: T4 ԴՆԹ պոլիմերազը բակտերիոֆագ T4-ի ԴՆԹ պոլիմերազն է: Ե՛վ Klenow-ը, և՛ T4 ԴՆԹ պոլիմերազը ունեն 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Նրանք երկուսն էլ չունեն 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, ինչը նրանց ավելի հարմար է դարձնում մոլեկուլային կենսաբանության բազմաթիվ կիրառությունների համար:
Ի՞նչ է Կլենոուն?
Klenow հատվածը ԴՆԹ պոլիմերազ է, որն օգտակար է մոլեկուլային կենսաբանության մեջ: Երբ E. coli ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ը ենթարկվում է պրոտեոլիտիկ մարսողության՝ բակտերիալ պրոտեազի՝ սուբտիլիսինի միջոցով, ստացվում է երկու բեկոր՝ մեկը մեծ բեկոր է, իսկ մյուսը՝ փոքր բեկոր: Կլենոուի բեկորը 68 կԴա չափի մեծ բեկոր է: Կլենոուի բեկորն ունի ԴՆԹ Pol I-ի 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային (սրբագրող) գործունեությունը: Կլենոուի բեկորի 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը հեշտացնում է սխալ ավելացված հիմքերի հեռացումը պոլիմերացման առաջընթացի ընթացքում: Կլենոուի բեկորը չի պարունակում 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, որը ցուցադրվում է ամբողջ երկարությամբ կամ անձեռնմխելի E-ով։coli ԴՆԹ պոլիմերազա 1. Այն ձեռնտու է, երբ միայն պոլիմերացման ակտիվությունն է անհրաժեշտ: Klenow-ի բեկորներն օգտագործվում են 5' ելուստները լցնելու, զոնդերի սինթեզը, ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը, երկշղթա ԴՆԹ-ի սինթեզը, cDNA-ի երկրորդ շղթայի սինթեզը և տեղային ուղղորդված մուտագենեզը:
Նկար 01. Klenow Fragment
Որոշակի կիրառություններում Կլենոուի հատվածի 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը նույնպես անցանկալի է դառնում: Այն կարող է հեռացվել՝ ներմուծելով մուտացիա գենում, որը ծածկագրում է Կլենոուի հատվածը: Ստացված Կլենովի բեկորը հայտնի է որպես էկզոկլենովի բեկոր: Հետևաբար, exo-Klenow բեկորն ունի միայն E. coli պոլիմերազ 1-ի 5'→3' պոլիմերազային ակտիվությունը։
Ի՞նչ է T4 ԴՆԹ պոլիմերազը:
T4 ԴՆԹ պոլիմերազը ԴՆԹ պոլիմերազ է, որը կատալիզացնում է ԴՆԹ-ի սինթեզը:Այն բակտերիոֆագ T4-ի կողմից կոդավորված սպիտակուց է: Կառուցվածքային առումով, T4 ԴՆԹ պոլիմերազը 898 ամինաթթվի մնացորդային սպիտակուց է (մոլեկուլային քաշը 103,6 կԴա): Այն պահանջում է ձևանմուշ և այբբենարան՝ սինթեզը կատալիզացնելու համար:
Նկար 02. T4 ԴՆԹ պոլիմերազ
Կլենոուի հատվածի նման, T4 ԴՆԹ պոլիմերազն ունի և՛ 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Ավելին, նրան բացակայում է նաև 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը։ T4 ԴՆԹ պոլիմերազը օգտակար է ԴՆԹ-ի բեկորների 5'-ցցված ծայրերը լցնելու համար: Այն նաև հաճախ օգտագործվում է կրկնակի շղթա ունեցող ԴՆԹ-ի 5' ծայրով կամ 3' ծայրով պիտակավորելու համար: T4 ԴՆԹ պոլիմերազը հաճախ օգտագործվում է բութ կլոնավորման ժամանակ: T4 ԴՆԹ պոլիմերազի 3'→5' էկզոնուկլեազային (սրբագրող) ակտիվությունն ավելի ուժեղ է (ավելի քան 200 անգամ), քան Կլենոուի բեկորը։ Ամենակարևորը, T4 ԴՆԹ պոլիմերազն ունի բարձր պրոցեսիվություն (400 նուկլեոտիդ վայրկյանում):
Որո՞նք են նմանությունները Klenow-ի և T4 DNA պոլիմերազի միջև:
- Klenow-ը և T4 ԴՆԹ պոլիմերազը երկու պրոկարիոտիկ պոլիմերազներ են:
- Երկու պոլիմերազներն ունեն 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:
- Նրանք չեն ցուցաբերում 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն։
- Երկու ֆերմենտներն էլ պահանջում են ձևանմուշ և այբբենարան ԴՆԹ-ի սինթեզը կատալիզացնելու համար:
- Այս ֆերմենտները կարող են ջերմային կերպով ապաակտիվացվել 75 0
Ո՞րն է տարբերությունը Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի միջև:
Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի հիմնական տարբերությունը յուրաքանչյուր ֆերմենտի ծագումն է: Klenow բեկորը ծագում է բակտերիայից, մինչդեռ T4 ԴՆԹ պոլիմերազը ծագում է բակտերիոֆագից, որը վիրուս է: T4 ԴՆԹ պոլիմերազն ունի բարձր պրոցեսիվություն, քան Klenow բեկորը: Ավելին, T4 ԴՆԹ պոլիմերազն ունի ուժեղ սրբագրման ակտիվություն, քան Klenow-ի հատվածը:Այսպիսով, սա ևս մեկ տարբերություն է Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի միջև:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան թվարկում է Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի միջև ավելի շատ տարբերություններ աղյուսակային տեսքով:
Ամփոփում – Klenow vs T4 DNA պոլիմերազա
Klenow բեկորը E. coli ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի մեծ բեկոր է: Այն ունի միայն 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Այն չունի 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն անձեռնմխելի E. coli ԴՆԹ-ի pol 1-ի: Հետևաբար, Klenow բեկորը բակտերիալ պոլիմերազ է: Մյուս կողմից, T4 ԴՆԹ պոլիմերազը պոլիմերազ է, որը կոդավորված է բակտերիոֆագ T4-ով: Կլենոուի բեկորին նման, այն պարունակում է և՛ 5'→3' պոլիմերազային և 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, և չունի 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն: Այնուամենայնիվ, T4 ԴՆԹ պոլիմերազն ունի բարձր պրոցեսիվություն և բարձր սրբագրման ակտիվություն, քան Klenow-ի հատվածը:Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է Klenow-ի և T4 ԴՆԹ պոլիմերազի միջև:
