Նիքի թարգմանության և վերջի լցման միջև հիմնական տարբերությունն այն է, որ նիկի թարգմանությունը գործընթաց է, որը ստեղծում է պիտակավորված ԴՆԹ-ի զոնդեր տարբեր հիբրիդացման ռեակցիաների համար, մինչդեռ վերջի լցումը տեխնիկա է, որը ստեղծում է բութ բեկորներ՝ ավելացնելով նուկլեոտիդներ միաշղթաների մեջ:
Նիքի թարգմանությունը և վերջի լրացումը երկու տեխնիկա են, որոնք օգտագործվում են մոլեկուլային կենսաբանության մեջ: Նիկ թարգմանությունը օգտագործվում է հիբրիդացման համար զոնդերը պիտակավորելու համար՝ հատուկ նուկլեոտիդային հաջորդականությունները հայտնաբերելու համար: Վերջնական լցոնումն օգտագործվում է բութ բեկորներ պատրաստելու համար, որոնք ունեին կպչուն ծայրեր՝ միաշղթա ելուստներով։ Երկու տեխնիկան էլ մեծ նշանակություն ունեն, և դրանք սովորաբար իրականացվում են մոլեկուլային հետազոտական լաբորատորիաներում:
Ի՞նչ է Nick Translation?
Նիքի թարգմանությունը կարևոր տեխնիկա է, որն օգտագործվում է տարբեր մոլեկուլային կենսաբանական տեխնիկայի համար պիտակավորված զոնդերի պատրաստման համար, ինչպիսիք են բլոտավորումը, in situ հիբրիդացումը, լյումինեսցենտային in situ հիբրիդացումը և այլն: Դա ԴՆԹ-ի պիտակավորման in vitro մեթոդ է: ԴՆԹ-ի զոնդերը օգտագործվում են ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի հատուկ հաջորդականությունները բացահայտելու համար: Պիտակավորված զոնդի օգնությամբ կարելի է նշել կամ պատկերացնել հատուկ բեկորներ նուկլեինաթթվի բարդ խառնուրդից: Հետևաբար, պիտակավորված զոնդերը պատրաստվում են տարբեր տեխնիկայի միջոցով: Նիկ թարգմանությունը նման մեթոդներից մեկն է, որը արտադրում է պիտակավորված զոնդեր DNase 1 և DNA polymerase 1 ֆերմենտների օգնությամբ:
Գծապատկեր 01. Նիկի թարգմանություն
Նիքի թարգմանության գործընթացը սկսվում է DNase 1 ֆերմենտի ակտիվությամբ:DNase 1-ը ներթափանցում է երկշղթա ԴՆԹ-ի ֆոսֆատային ողնաշարի մեջ՝ ճեղքելով ֆոսֆոդիստերային կապերը նուկլեոտիդների միջև: Հենց որ նիկը ստեղծվի, կստեղծվի նուկլեոտիդի ազատ 3' OH խումբ, և դրա վրա կգործի ԴՆԹ պոլիմերազ 1 ֆերմենտը: ԴՆԹ պոլիմերազ 1-ի 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը հեռացնում է նուկլեոտիդները անցքից դեպի ԴՆԹ շղթայի 3' ուղղությունը:
Միաժամանակ գործում է ԴՆԹ պոլիմերազ 1 ֆերմենտի պոլիմերազային ակտիվությունը և ավելացնում է նուկլեոտիդներ՝ փոխարինելու հեռացված նուկլեոտիդներին: Եթե նուկլեոտիդները պիտակավորված են, փոխարինումը տեղի կունենա պիտակավորված նուկլեոտիդներով, և դա կնշի ԴՆԹ-ն նույնականացման համար: Վերջապես, այս նոր սինթեզված պիտակավորված ԴՆԹ-ն կարող է օգտագործվել որպես զոնդ տարբեր հիբրիդացման ռեակցիաներում:
Ի՞նչ է վերջի լրացումը:
Վերջային լցոնումը մոլեկուլային կենսաբանության մեջ օգտագործվող տեխնիկա է՝ բութ բեկորներ պատրաստելու համար: Սահմանափակման մարսողությունը առաջացնում է բեկորներ՝ ելուստներով: Այս բեկորները կարող են անհամատեղելի լինել պլազմիդային վեկտորների մեջ կապելու համար:Վեկտորները հաճախ բթացվում են, որպեսզի անհամատեղելի ծայրերը միանան: Հետևաբար, ելուստներով բեկորները կարող են բթացնել՝ ավելացնելով նուկլեոտիդները կոմպլեմենտար շղթային՝ օգտագործելով վերելակը որպես պոլիմերացման ձևանմուշ: Այս գործընթացը հայտնի է որպես վերջնական լրացում։
ԴՆԹ պոլիմերազները, ինչպիսիք են ԴՆԹ պոլիմերազ I-ի Կլենովի բեկորը և T4 ԴՆԹ պոլիմերազը, կատալիզացնում են վերջի լցոնումը: Նրանք ավելացնում են նուկլեոտիդներ, որպեսզի լրացնեն (5' → 3') և ետ ծամեն (3' → 5'): Երբ կպչուն ծայրերը լցվում են, դրանք դառնում են բութ և պատրաստ են միանալու վեկտորի մեջ:
Ավելին, վերջի լցոնումը կարող է օգտագործվել ԴՆԹ մոլեկուլները պիտակավորելու համար: Այնուամենայնիվ, այն կարող է օգտագործվել միայն կպչուն ծայրերով ԴՆԹ մոլեկուլները պիտակավորելու համար: Նիքի թարգմանության համեմատ, վերջի լցոնումը ավելի մեղմ մեթոդ է, որը հազվադեպ է ԴՆԹ-ի կոտրվածքների պատճառ դառնում:
Որո՞նք են նմանությունները Nick Translation-ի և End Filling-ի միջև:
- Եվ նիկի թարգմանությունը և վերջի լրացումը մոլեկուլային կենսաբանական տեխնիկա են:
- Դրանք կարող են օգտագործվել զոնդերը պիտակավորելու համար:
- Երկուսն էլ in vitro են
Ո՞րն է տարբերությունը Nick Translation-ի և End Filling-ի միջև:
Նիքի թարգմանությունը տեխնիկա է, որը ստեղծում է պիտակավորված զոնդեր հիբրիդացման համար: Ի հակադրություն, վերջի լցոնումը տեխնիկա է, որը ստեղծում է բութ բեկորներ վեկտորների մեջ կապելու համար: Այսպիսով, սա հիմնական տարբերությունն է նիկի թարգմանության և վերջի լրացման միջև: Ավելին, Nick թարգմանությունը պահանջում է օգտագործել 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, մինչդեռ վերջի լցումը չի պահանջում 5'-ից 3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ավելի մանրամասն ներկայացնում է կեղծ թարգմանության և վերջի լրացման տարբերությունները:
Ամփոփում – Nick Translation vs End Filling
Նիկ թարգմանությունը մեթոդ է, որը ներառում է ռադիոպիտակավորված նուկլեոտիդներ ԴՆԹ-ում: Այն սինթեզում է պիտակավորված զոնդերը՝ հիմնված DNase 1 և E. coli ԴՆԹ պոլիմերազ 1 ֆերմենտների գործունեության վրա: Մյուս կողմից, վերջի լցոնումը տեխնիկա է, որն առաջացնում է բութ բեկորներ: Երբ բեկորներն ունենում են կպչուն ծայրեր (միաշղթա ելուստներ), անհրաժեշտ է դրանք դարձնել բութ ծայրեր՝ վեկտորների մեջ կապվելու համար։ Վերջի լցոնումը ավելացնում է համատեղելի նուկլեոտիդներ և ստեղծում բութ ծայրամասային բեկորներ, որպեսզի դրանք համատեղելի լինեն կապակցման համար: Այսպիսով, սա ամփոփում է կեղծ թարգմանության և վերջի լրացման միջև եղած տարբերությունը:
