Քրոմատոֆոկուսացման և իզոէլեկտրական ֆոկուսավորման հիմնական տարբերությունն այն է, որ քրոմատոֆոկուսացումը սյունակային քրոմատոգրաֆիայի մեթոդ է, որն օգտագործում է իոնափոխանակման խեժեր, մինչդեռ իզոէլեկտրական ֆոկուսացումը էլեկտրոֆորեզի տեխնիկայի մի տեսակ է, որն օգտագործում է անշարժացված pH գրադիենտ գելեր::
Քրոմատոֆոկուսավորումը և իզոէլեկտրական կենտրոնացումը երկու տեխնիկա են, որոնք բաժանում են սպիտակուցներն ըստ իրենց իզոէլեկտրական կետերի: Ե՛վ քրոմատոֆոկուսացումը, և՛ իզոէլեկտրական կենտրոնացումը ունեն մեծ լուծող ուժ: Քրոմատոֆոկուսացումը բարձր լուծաչափով սյունակային քրոմատոգրաֆիայի մեթոդ է, մինչդեռ իզոէլեկտրական ֆոկուսացումը էլեկտրաֆորետիկ տարանջատման մեթոդ է:Ավելին, քրոմատոֆոկուսացումը չի օգտագործում էլեկտրական դաշտ, մինչդեռ իզոէլեկտրական ֆոկուսավորման համար անհրաժեշտ է էլեկտրական դաշտ:
Ի՞նչ է Chromatofocusing?
Քրոմատոֆոկուսացումը բարձր էլյուցիոն քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որը բաժանում է սպիտակուցները՝ ըստ դրանց իզոէլեկտրական կետի տարբերությունների: Այն օգտագործում է իոնափոխանակման խեժի սյուն և ներքին զարգացած pH գրադիենտ: Ի տարբերություն իզոէլեկտրական կենտրոնացման, քրոմատոֆոկուսացումը չի ներառում էլեկտրական դաշտ: Chromatofocusing-ը մաքրման հզոր տեխնիկա է, որը կարող է լուծել շատ նման մոլեկուլները, որոնք նույնիսկ տարբերվում են միայն 0,02 pH միավորով: Հետևաբար, քրոմատոֆոկուսացումը լավագույնս համապատասխանում է որպես վերջնական փայլեցման փուլ, երբ շատ նմանատիպ բաղադրիչները բաժանելու համար պահանջվում է բարձր լուծաչափություն:
Քրոմատոֆոկուսավորման ժամանակ նմուշը կիրառվում է սյունակի վրա՝ խառնելով այն մեկնարկային բուֆերի հետ: Սպիտակուցները, որոնք գտնվում են իրենց իզոէլեկտրական կետից բարձր pH-ով, բացասական լիցքավորված են և դրանք մնում են սյունակի վերևի մոտ, մինչդեռ մյուս սպիտակուցները, որոնք գտնվում են իրենց իզոէլեկտրական կետից ցածր pH-ում, գաղթում են սյունակի ներքև:Ամենաբարձր իզոէլեկտրական կետով սպիտակուցը առաջինը զտվում է, իսկ ամենացածր իզոէլեկտրական կետով սպիտակուցը վերջինն է սյունակից: Այս տեխնիկայի վրա ազդում են մի քանի գործոններ, ինչպիսիք են սպիտակուցային տեղումները և pH գրադիենտի գծայինությունը:
Ի՞նչ է իզոէլեկտրական կենտրոնացումը:
Իզոէլեկտրական կենտրոնացումը տեխնիկա է, որը բաժանում է տարբեր մոլեկուլներ՝ ելնելով դրանց իզոէլեկտրական կետից: Այն նաև հայտնի է որպես էլեկտրաֆոկուս: Այս տեխնիկան հաճախ օգտագործվում է գելում սպիտակուցի բաժանման համար: Իզոէլեկտրական ֆոկուսավորման դեպքում նմուշն ավելացվում է անշարժացված pH գրադիենտ (IPG) գելերի մեջ: IPG գելը ակրիլամիդ գելային մատրից է, որը համապոլիմերացված է pH գրադիենտով: Սպիտակուցները գաղթում են դեպի կաթոդ, մինչև որ գտնեն իրենց իզոէլեկտրական կետերի pH հատվածը: Երբ սպիտակուցը հասնում է pH-ի, որը չունի զուտ լիցք, միգրացիան դադարում է և տալիս է անշարժ գոտի: Նմանապես, յուրաքանչյուր սպիտակուցը իր իզոէլեկտրական կետին համապատասխան pH գրադիենտի մի շերտ է տալիս:
Նկար 01. Իզոէլեկտրական կենտրոնացում
Իզոէլեկտրական ֆոկուսացումը գելային երկչափ էլեկտրոֆորեզի առաջին քայլն է: Այդ տեխնիկայում սպիտակուցները սկզբում բաժանվում են ըստ իրենց իզոէլեկտրական կետերի՝ իզոէլեկտրական կենտրոնացման միջոցով, այնուհետև բաժանվում են ըստ իրենց մոլեկուլային քաշի՝ SDS-PAGE-ի միջոցով:
Որո՞նք են նմանությունները Chromatofocusing-ի և Isoelectric Focusing-ի միջև:
- Քրոմատոֆոկուսավորումը և իզոէլեկտրական ֆոկուսացումը երկու խիստ լուծվող մեթոդներ են:
- Երկուսն էլ հիմնված են սպիտակուցների իզոէլեկտրական կետի վրա:
- Այս տեխնիկան օգտագործում է pH գրադիենտ:
- Երկու ընթացակարգերն էլ տեղեկատվական են մարդու հեմոգլոբինի տարբերակների բնութագրման համար:
- Նրանք կարող են լուծել այն մոլեկուլները, որտեղ pI արժեքները տարբերվում են 0,02 pH միավորով:
Ո՞րն է տարբերությունը քրոմատոֆոկուսացման և իզոէլեկտրական կենտրոնացման միջև:
Chromatofocusing-ը բարձր լուծաչափով սյունակային քրոմատոգրաֆիայի տեխնիկա է, որը բաժանում է սպիտակուցներն ըստ դրանց իզոէլեկտրական կետի: Ի հակադրություն, իզոէլեկտրական ֆոկուսը էլեկտրաֆորետիկ տեխնիկա է, որը բաժանում է սպիտակուցները՝ ըստ իրենց իզոէլեկտրական կետի, էլեկտրական դաշտի կիրառմամբ մազանոթում ձևավորված pH գրադիենտի երկայնքով: Այսպիսով, սա է հիմնական տարբերությունը քրոմատոֆոկուսացման և իզոէլեկտրական կենտրոնացման միջև:
Քրոմատոֆոկուսացման և իզոէլեկտրական կենտրոնացման միջև ևս մեկ տարբերություն այն է, որ քրոմատոֆոկուսացումը չի ներառում էլեկտրական դաշտ, մինչդեռ իզոէլեկտրական կենտրոնացման համար անհրաժեշտ է էլեկտրական դաշտ:
Ամփոփում – Chromatofocusing vs isoelectric Focusing
Քրոմատոֆոկուսավորումը և իզոէլեկտրական ֆոկուսավորումը երկու նմանատիպ մեթոդներ են, որոնք ունեն մոլեկուլների, հատկապես շատ նման մոլեկուլների բարձր լուծելու ունակություն: Քրոմատոֆոկուսացումը բարձր լուծաչափով սյունակային քրոմատոգրաֆիայի տեխնիկա է, մինչդեռ իզոէլեկտրական ֆոկուսացումը էլեկտրոֆորեզի մեթոդ է: Քրոմատոֆոկուսացումը չի ներառում էլեկտրական դաշտ, ի տարբերություն իզոէլեկտրական կենտրոնացման: Այսպիսով, սա ամփոփում է քրոմատոֆոկուսացման և իզոէլեկտրական կենտրոնացման միջև եղած տարբերությունը:
