Տարբերությունը հյուսիսային հարավային և արևմտյան բլոթի միջև

2024 Հեղինակ: Alex Aldridge | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-17 13:41

Հիմնական տարբերություն – Հյուսիսային ընդդեմ հարավի ընդդեմ արևմտյան բլոթինգ

ԴՆԹ-ի, ՌՆԹ-ի և սպիտակուցների հատուկ հաջորդականությունների հայտնաբերումը կարևոր է մոլեկուլային կենսաբանության տարբեր տեսակի ուսումնասիրությունների համար: Գելային էլեկտրոֆորեզը մեթոդ է, որը բաժանում է ԴՆԹ, ՌՆԹ և սպիտակուցներ՝ ըստ դրանց չափերի: Գելի պրոֆիլներից ԴՆԹ-ի որոշակի հաջորդականությունը, ՌՆԹ-ի հաջորդականությունը կամ սպիտակուցը հայտնաբերվում են հատուկ տեխնիկայի միջոցով, որը կոչվում է բլոտավորում և հիբրիդացում պիտակավորված զոնդերով: Գոյություն ունեն երեք տարբեր տեսակի մաքրման մեթոդներ՝ հարավային, հյուսիսային և արևմտյան: Հյուսիսային հարավային և արևմտյան բլոթի միջև հիմնական տարբերությունը կայանում է նրանում, թե ինչպիսի մոլեկուլ է այն հայտնաբերում նմուշից:Southern blotting-ը մեթոդ է, որը հայտնաբերում է ԴՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն ԴՆԹ-ի նմուշից: Հյուսիսային blotting-ը տեխնիկա է, որը հայտնաբերում է ՌՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն ՌՆԹ-ի նմուշից: Western blotting-ը մեթոդ է, որը հայտնաբերում է հատուկ սպիտակուցը սպիտակուցի նմուշից:

Ի՞նչ է Southern Blotting-ը:

Southern blotting տեխնիկան մշակվել է E. M. Southern-ի կողմից 1975 թվականին՝ ԴՆԹ-ի նմուշից որոշակի ԴՆԹ հաջորդականության նույնականացման համար: Սա մոլեկուլային կենսաբանության մեջ ներդրված բլոտինգի առաջին տեխնիկան է: Այն հնարավորություն է տվել հայտնաբերել ԴՆԹ-ից հատուկ գեներ, ԴՆԹ-ից հատուկ բեկորներ և այլն: Սաութերն բլոտինգի տեխնիկան մի քանի քայլ է ներառում: Դրանք հետևյալն են.

1. ԴՆԹ-ն մեկուսացված է նմուշից և մարսվում է սահմանափակող էնդոնուկլեազներով:
2. Մարսված նմուշն առանձնացվում է Ագարոզա գելի էլեկտրոֆորեզով:
3. Գելի մեջ ԴՆԹ-ի բեկորները վերածվում են մեկ թելերի՝ օգտագործելով ալկալային լուծույթ:
4. Միաշղթա ԴՆԹ-ն տեղափոխվում է նիտրոցելյուլոզային ֆիլտրի թաղանթ մազանոթային փոխանցման միջոցով:
5. Տեղափոխված ԴՆԹ-ն մշտապես ամրացվում է թաղանթի վրա:
6. Մեմբրանի վրա ամրացված ԴՆԹ-ն հիբրիդացված է պիտակավորված զոնդերով:
7. Չկապված ԴՆԹ-ն լվացվում է թաղանթից:
8. Ռենտգեն ֆիլմը ենթարկվում է թաղանթին և պատրաստվում է ավտոռադիոգրաֆիկ:

Հարավային բլոթը կիրառվում է մոլեկուլային կենսաբանության տարբեր ասպեկտների համար: Այն օգտակար է RFLP քարտեզագրման, դատաբժշկական հետազոտությունների, գեների արտահայտման մեջ ԴՆԹ-ի մեթիլացման, գենետիկ խանգարումների ժամանակ մուտացված գեների հայտնաբերման, ԴՆԹ մատնահետքերի և այլնի համար:

Գծապատկեր 01. Հարավային բծերի տեխնիկա

Ի՞նչ է Հյուսիսային բլոտինգը:

Northern blotting-ը մեթոդ է, որը նախատեսված է նմուշից ՌՆԹ-ի որոշակի հաջորդականությունը կամ mRNA հաջորդականությունը հայտնաբերելու համար՝ գեների էքսպրեսիան ուսումնասիրելու համար: Այս տեխնիկան մշակվել է Alwine-ի, Kemp-ի և Stark-ի կողմից 1979թ.-ին: Այն տարբերվում է հարավային և վեսթերն բլոտինգի տեխնիկայից մի քանի քայլերի շնորհիվ: Այնուամենայնիվ, այս տեխնիկան իրականացվում է նաև գելային էլեկտրոֆորեզի, բլոտինգի և հիբրիդացման միջոցով՝ հատուկ պիտակավորված զոնդերով և հայտնաբերմամբ: Հյուսիսային բլոտինգի տեխնիկան կատարվում է հետևյալ կերպ.

1. ՌՆԹ-ն հանվում է նմուշից և առանձնացվում գելային էլեկտրոֆորեզով:
2. ՌՆԹ-ն գելից տեղափոխվում է բլոտող թաղանթի վրա և ամրացվում:
3. Մեմբրանը մշակվում է cDNA-ից կամ ՌՆԹ-ից պատրաստված պիտակավորված զոնդով (զոնդը լրացնում է նմուշի որոշակի հաջորդականությունը):
4. Զոնդը ինկուբացվում է թաղանթով, որպեսզի կապվի որոշակի հաջորդականությամբ:
5. Չկապված զոնդերը լվացվում են:
6. Հիբրիդացված բեկորները հայտնաբերվում են ավտոռադիոգրաֆի միջոցով:

Northern blotting-ը կարևոր գործիք է հիբրիդացված mRNA-ի հայտնաբերման և քանակականացման, ՌՆԹ-ի դեգրադացիայի ուսումնասիրման, ՌՆԹ-ի կիսամյակի գնահատման, ՌՆԹ-ի միացման հայտնաբերման, գեների արտահայտման ուսումնասիրության և այլնի համար:

Գծապատկեր 02. Հյուսիսային բլթինգ

Ի՞նչ է Western Blotting-ը:

Western blotting-ը սպիտակուցային խառնուրդից հատուկ սպիտակուցի հայտնաբերման մեթոդ է պիտակավորված հակամարմինների միջոցով: Հետևաբար, western blot-ը հայտնի է նաև որպես իմունոբլոտ: Այս տեխնիկան ներդրվել է Towbin et al-ի կողմից 1979 թվականին և այժմ այն սովորաբար իրականացվում է լաբորատորիաներում՝ սպիտակուցի վերլուծության համար: Քայլերը հետևյալն են.

1. Սպիտակուցներն արդյունահանվում են նմուշից
2. Սպիտակուցները բաժանվում են ըստ իրենց չափերի՝ օգտագործելով պոլիակրիլամիդ գելային էլեկտրոֆորեզ
3. Առանձնացված մոլեկուլները տեղափոխվում են PVDF թաղանթ կամ նիտրոցելյուլոզային թաղանթ՝ էլեկտրապորացիայի միջոցով
4. Թաղանթն արգելափակված է հակամարմինների հետ ոչ սպեցիֆիկ կապվելու համար
5. Տեղափոխված սպիտակուցները կապված են առաջնային հակամարմինների հետ (ֆերմենտային պիտակավորված հակամարմիններ):
6. Թաղանթը լվանում են ոչ հատուկ կապված առաջնային հակամարմինները հեռացնելու համար
7. Կապված հակամարմինները հայտնաբերվում են՝ ավելացնելով ենթաշերտը և հայտնաբերելով գոյացած գունավոր նստվածքը

Western blotting-ը օգտակար է մարդու շիճուկի նմուշում ՄԻԱՎ-ի դեմ հակամարմինների հայտնաբերման համար: Western blot-ը կարող է օգտագործվել նաև որպես հեպատիտ B-ի վարակի հաստատող թեստ և խելագար կովի հիվանդության վերջնական թեստ:

Գծապատկեր 03. Western Blotting

Ո՞րն է տարբերությունը հյուսիսային հարավային և արևմտյան բլոտինգի միջև:

Հյուսիսային ընդդեմ հարավային ընդդեմ արևմտյան բլոթինգ
Հայտնաբերվել է մոլեկուլի տեսակ
Northern Blotting	Northern blotting-ը հայտնաբերում է ՌՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն ՌՆԹ-ի նմուշից:
Southern Blotting	Southern blotting-ը հայտնաբերում է ԴՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն ԴՆԹ-ի նմուշից:
Western Blotting	Western blotting-ը սպիտակուցի նմուշից հայտնաբերում է հատուկ սպիտակուց:
Գելի տեսակ
Northern Blotting	Սա օգտագործում է Ագարոզա/ֆորմալդեհիդ գել:
Southern Blotting	Սա օգտագործում է Agarose գել:
Western Blotting	Սա օգտագործում է պոլիակրիլամիդ գել:
Բլոտի մեթոդ
Northern Blotting	Սա մազանոթային փոխանցում է։
Southern Blotting	Սա մազանոթային փոխանցում է։
Western Blotting	Սա էլեկտրական փոխանցում է։
Օգտագործված զոնդերը
Northern Blotting	cDNA կամ RNA զոնդեր, որոնք պիտակավորված են ռադիոակտիվ կամ ոչ ռադիոակտիվ կերպով:
Southern Blotting	ԴՆԹ-ի զոնդերը պիտակավորված են ռադիոակտիվ կամ ոչ ռադիոակտիվ կերպով:
Western Blotting	Առաջնային հակամարմինները օգտագործվում են որպես զոնդ:
Հայտնաբերման համակարգ
Northern Blotting	Սա արվում է ավտոռադիոգրաֆով կամ լույսի կամ գույնի փոփոխության հայտնաբերմամբ:
Southern Blotting	Սա արվում է ավտոռադիոգրաֆով, լույսի կամ գույնի փոփոխության հայտնաբերմամբ:
Western Blotting	Սա արվում է լույսի կամ գույնի փոփոխության հայտնաբերման միջոցով:

Ամփոփում – Հյուսիսային ընդդեմ Հարավային ընդդեմ Արևմտյան Բլոտինգ

Բլոտինգը հատուկ տեխնիկա է, որը մշակվել է նմուշներից հատուկ ԴՆԹ-ի, ՌՆԹ-ի կամ սպիտակուցի նույնականացման համար:Գոյություն ունեն երեք առանձին բլոտման պրոցեդուրաներ՝ հյուսիսային, հարավային և արևմտյան՝ որոշակի տեսակի մոլեկուլ հայտնաբերելու համար: Northern blotting տեխնիկան նախատեսված է ՌՆԹ-ի խառնուրդից ՌՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն հայտնաբերելու համար: Southern blotting տեխնիկան հնարավորություն է տալիս հայտնաբերել ԴՆԹ-ի որոշակի հաջորդականություն ԴՆԹ-ի նմուշից, իսկ Western blotting տեխնիկան մշակվել է սպիտակուցային խառնուրդից հատուկ սպիտակուցը նույնականացնելու համար: