Հիմնական տարբերություն – Կլոնավորում ընդդեմ ենթակլոնավորման
Կլոնավորումը և ենթակլոնավորումը մոլեկուլային կենսաբանական պրոցեդուրաներ են, որոնք ստեղծում են գենետիկորեն նույնական բջիջներ կամ օրգանիզմներ, որոնք կրում են հետաքրքրություն ներկայացնող ԴՆԹ կամ գեն: Կլոնավորումը տեխնիկա է, որը ներառում է հետաքրքրված գենի կամ ԴՆԹ-ի տեղադրումը վեկտորի մեջ, դրա վերարտադրությունը հյուրընկալող բակտերիաների ներսում և բջիջների կամ օրգանիզմների արտադրություն, որոնք գենետիկական կառուցվածքի ճշգրիտ պատճեններն են: Ենթկլոնավորումը տեխնիկա է, որը ներառում է հետաքրքրող գենի ներդրումը, որն արդեն տեղադրված է վեկտորի մեջ, երկրորդական վեկտորի մեջ, դրա վերարտադրությունը հյուրընկալող բակտերիաում և բջիջների կամ օրգանիզմների գենետիկորեն նույնական պատճենների արտադրություն:Կլոնավորման և ենթակլոնավորման հիմնական տարբերությունն այն է, որ կլոնավորման ժամանակ հետաքրքրող գենը, երբ միանում է վեկտորին, շարունակում է կլոնավորման գործընթացը, մինչդեռ ենթակլոնավորման ժամանակ արդեն իսկ կլոնավորված հետաքրքրող գենը առանձնացվում է մայր վեկտորից և նորից տեղադրվում: ստացողի վեկտոր և շարունակիր գործընթացը։
Ի՞նչ է կլոնավորումը:
Կլոնավորումն այն պրոցեդուրան է, որն առաջացնում է գենետիկորեն նույնական օրգանիզմներ կամ բջիջներ: Բնության մեջ կլոնավորումը տեղի է ունենում անսեռ բազմացման միջոցներով։ Երբ չկա գենետիկական ռեկոմբինացիա կամ փոփոխություն, դուստր բջիջները ստանում են ծնողի նույն գենետիկական կազմը: Պրոկարիոտ և էուկարիոտ օրգանիզմները կլոններ են ստեղծում երկուական տրոհման, բողբոջման, միտոզի և այլնի միջոցով: Մոլեկուլային կենսաբանության մեջ գեների կլոնավորումը կամ ԴՆԹ-ի հատուկ բեկորները հանրաճանաչ մեթոդ են ԴՆԹ-ի տվյալ հատվածի կառուցվածքն ու գործառույթը ուսումնասիրելու համար:
Մոլեկուլային կլոնավորման հիմնական նպատակը գենետիկորեն նույնական բջիջների կամ օրգանիզմների միլիոնավոր պատճենների ստեղծումն է, որոնք կրում են հետաքրքրող ԴՆԹ-ի հատվածը (հիմնականում գեներ):Այն ստեղծում է օրգանիզմներ մյուսի ճշգրիտ գենետիկական պատճեններով: Հիմնականում հատուկ գեները կլոնավորվում են մոլեկուլային հետազոտություններում՝ կառուցվածքային և ֆունկցիոնալ տեղեկատվություն ստանալու և ԴՆԹ-ի հաջորդականության համար: Բացի այդ, հատուկ սպիտակուցների կամ արտադրանքի արտադրության համար լայնածավալ կլոնավորումը լայնորեն օգտագործվում է:
Կլոնավորման կարգ
Կլոնավորման ընթացակարգի հիմնական քայլերը հետևյալն են.
- Հետաքրքրվող գենի նույնականացում և մեկուսացում. (ՊՇՌ-ով հետաքրքրող գենի ուժեղացում):
- Հետաքրքրող գենի սահմանափակում մարսողություն (սահմանափակող էնդոնուկլեազը կտրում է գենը):
- Վեկտորի ԴՆԹ-ի սահմանափակ մարսողություն. (Վեկտորային ԴՆԹ-ն կտրվում է նաև նույն սահմանափակող էնդոնուկլեազի միջոցով):
- Գենի ներդրում վեկտորի մեջ և ռեկոմբինանտ մոլեկուլի ձևավորում։
- Ռեկոմբինանտ վեկտորի փոխակերպում հյուրընկալ բակտերիաի։
- Տրանսֆորմացված բակտերիաների մեկուսացում և նույնականացում (պլազմիդային վեկտորը պետք է պարունակի ընտրովի գեն, առավել հաճախ՝ հակաբիոտիկների դիմադրողականության գեն՝ վերափոխված բակտերիաների ցուցադրման համար):
- Ռեկոմբինանտ գենի արտահայտություն հյուրընկալողի ներսում։
Նկար_01. Կլոնավորման կարգ
Ի՞նչ է ենթակլոնավորումը:
Սուբկլոնավորումը հետաքրքրություն ներկայացնող գենը մեկ վեկտորից մյուս վեկտոր տեղափոխելու պրոցեդուրա է՝ տեսնելու գենի արտահայտությունը՝ գենի ցանկալի ֆունկցիոնալությունը ձեռք բերելու համար: Այս մեթոդում ներգրավված են երկու վեկտորներ. այն է՝ մայր վեկտոր և նպատակակետ վեկտոր: Կլոնավորված ներդիրները կրկին տեղափոխվում են երկրորդ վեկտորի մեջ ենթակլոնավորման մեջ: Գենը առաջին վեկտորից երկրորդ վեկտորին փոխանցելու նպատակն է ստանալ մի բան, որը չէր կարող անել առաջին վեկտորը կամ գենը կրկին առանձնացնել ԴՆԹ-ի արդեն կլոնավորված հատվածում և այն արտահայտել միայնակ: Այս ընթացակարգի սկզբում օգտագործվում են սահմանափակող ֆերմենտներ:
Ենթակլոնավորման կարգ
Ենթակլոնավորման հիմնական քայլերը հետևյալն են.
- սահմանափակող էնդոնուկլեազների օգնությամբ ԴՆԹ-ի տարանջատում դոնոր պլազմիդում (ծնող վեկտոր):
- Հետաքրքրվող ԴՆԹ-ի ուժեղացում՝ օգտագործելով PCR:
- PCR արտադրանքի (հետաքրքրվող ԴՆԹ) մաքրում գելային էլեկտրոֆորեզով:
- Ստացող պլազմիդի բացում նույն սահմանափակող էնդոնուկլեազներով, որոնք օգտագործվում են ծնող պլազմիդի մեջ հետաքրքրող ԴՆԹ-ն առանձնացնելու համար:
- Հետաքրքրվող ԴՆԹ-ի (գենի) միացում ստացող պլազմիդի մեջ՝ ենթկլոնավորված պլազմիդի ստեղծման համար:
- Ենթկլոնավորված վեկտորի փոխակերպումը իրավասու հյուրընկալող բակտերիաի:
- Փոխակերպված բջիջների զննում։
- Պլազմիդային ԴՆԹ-ի մաքրում և օգտագործում ԴՆԹ-ի հաջորդականության կամ գեների արտահայտման համար՝ ցանկալի արտադրանք ստանալու համար:
Ենթակլոնավորումն իրականացվում է գեների կլոնավորված խմբից մեկ գենի մեկուսացման դեպքերում կամ երբ հետաքրքրող գենը պետք է տեղափոխվի օգտակար պլազմիդի՝ հետաքրքրող գենի ճշգրիտ գործառույթը տեսնելու համար::
Գծապատկեր_02. ենթակլոնավորման կարգ
Ի՞նչ տարբերություն կա կլոնավորման և ենթակլոնավորման միջև:
Cloning vs Subcloning |
|
| Կլոնավորումն այն պրոցեդուրան է, որն առաջացնում է գենետիկորեն նույնական օրգանիզմներ կամ բջիջներ: | Սուբկլոնավորումը հետաքրքրություն ներկայացնող գենը մեկ վեկտորից մյուս վեկտոր տեղափոխելու պրոցեդուրա է՝ տեսնելու գենի արտահայտությունը՝ գենի ցանկալի ֆունկցիոնալությունը ձեռք բերելու համար: |
| Գործընթաց | |
| Առանձնացնել հետաքրքրող ԴՆԹ-ն օրգանիզմից և մեկ անգամ տեղադրել վեկտորի մեջ և կլոնավորել | Արդեն կլոնավորված ԴՆԹ-ն առանձնացվում է առաջին վեկտորից և տեղադրվում երկրորդ վեկտորի մեջ և կլոնավորվում։ |
| Տեղադրեք շարժում վեկտորների միջոցով | |
| Չի տեղափոխում ներդիրները (հետաքրքիր ԴՆԹ) մի վեկտորից մյուս վեկտոր: | Տեղափոխեք ներդիրները մայր վեկտորից դեպի նպատակակետ վեկտոր: |
Ամփոփում – Կլոնավորում ընդդեմ ենթակլոնավորման
Կլոնավորումը ստեղծում է գենետիկորեն նույնական բջիջներ կամ օրգանիզմներ՝ ներդրված հետաքրքրող գենով կամ ԴՆԹ-ով: Այն ընթանում է հետաքրքրող ԴՆԹ-ի տարանջատման և տեղադրման միջոցով վեկտորի և արտահայտման միջոցով հյուրընկալող բակտերիաների մեջ: Ենթակլոնավորումը կիսում է նմանատիպ քայլերը կլոնավորման հետ: Այնուամենայնիվ, ենթակլոնավորման ժամանակ արդեն կլոնավորված ԴՆԹ-ի բեկորը (հետաքրքիր գենը) տեղադրվում է վեկտորի մեջ և փոխակերպվում հյուրընկալող բակտերիաի: Դա կլոնավորման և ենթակլոնավորման հիմնական տարբերությունն է:
