FPLC-ի և HPLC-ի հիմնական տարբերությունն այն է, որ FPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որը մաքրում է խոշոր կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են սպիտակուցները, նուկլեոտիդները և պեպտիդները, մինչդեռ HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որը բաժանում է փոքր մոլեկուլային քաշի միացությունները:
Հեղուկ քրոմատագրությունը մեթոդ է, որն օգտագործվում է նմուշը առանձին բաղադրիչների բաժանելու համար: Այս տարանջատումը տեղի է ունենում շարժական և ստացիոնար փուլերի հետ կոնկրետ նմուշների փոխազդեցության պատճառով: Նմուշի բաղադրիչներն առանձնացվում են՝ ելնելով հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի շարժական փուլի նկատմամբ յուրաքանչյուր բաղադրիչի մերձեցությունից: Երբ շարժական փուլը և նմուշն անցնում են սյունակի միջով, նմուշի բաղադրիչները սկսում են բաժանվել գոտիների, որոնք կարող են հայտնաբերվել UV-VIS սպեկտրոսկոպիայի միջոցով:Հետևաբար, FPLC-ն և HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի երկու տեսակ են:
Ինչ է FPLC?
FPLC-ը հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որը մաքրում է խոշոր կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են սպիտակուցները, նուկլեոտիդները և պեպտիդները: Արագ սպիտակուցային հեղուկ քրոմատոգրաֆիան (FPLC) առաջին անգամ մշակվել և վաճառվել է Շվեդիայում Pharmacia ընկերության կողմից 1982 թվականին: Այն հաճախ օգտագործվում է սպիտակուցային խառնուրդները վերլուծելու կամ մաքրելու համար: Սա տեղի է ունենում շարժվող հեղուկի (շարժական փուլ) և ծակոտկեն պինդ նյութի (ստացիոնար փուլ) նմուշի բաղադրիչների հարաբերության սկզբունքի հիման վրա: FPLC-ում շարժական փուլը բուֆեր է, իսկ ստացիոնար փուլը բշտիկներից կազմված խեժ է: Այն սովորաբար բաղկացած է խաչաձեւ կապակցված ագարոզից, որը փաթեթավորված է գլանաձեւ ապակու կամ պլաստիկ սյունակի մեջ:
Նկար 01. FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) ապարատ
FLPC ռազմավարության մեծ մասում օգտագործվում է իոնափոխանակման խեժ: Հետևաբար, հետաքրքրող սպիտակուցը լիցքի փոխազդեցությամբ կկապվի խեժին: FLPC տեխնիկան նաև օգտագործում է երկու բուֆեր՝ բուֆեր 1 (գործող բուֆեր) և բուֆեր 2 (էլյուցիոն բուֆեր): Սկզբում, երբ բուֆերը և նմուշի խառնուրդն անցնում են սյունակի միջով, խառնուրդի մեջ հետաքրքրող սպիտակուցը լիցքի փոխազդեցությամբ կկապվի խեժի հետ: Բայց հետաքրքրող սպիտակուցը տարանջատվում է և վերադառնում է լուծույթի բուֆերային լուծույթին, երբ լուծույթի բուֆերն անցնում է գործընթացի վերջում գտնվող սյունակով: Հետագայում լուծույթը (լուծույթը, որը պարունակում է հետաքրքրող սպիտակուց) անցնում է երկու դետեկտորների միջով, որոնք չափում են աղի կոնցենտրացիան և սպիտակուցի կոնցենտրացիան։ Քանի որ յուրաքանչյուր սպիտակուցը մաքրվում է, այն հայտնվում է որպես «գագաթնակետ» հայտնաբերման ժամանակ և կարող է հավաքվել հետագա օգտագործման համար:
Ի՞նչ է HPLC-ն:
HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որն առանձնացնում է փոքր մոլեկուլային քաշի միացությունները: 1969թ.-ին առաջին HPLC-ն կոմերցիոն կերպով արտադրվել է ԱՄՆ-ի Waters Corporation-ի կողմից:Բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիայում (HPLC) լուծիչի (շարժական փուլի) նմուշային խառնուրդը (անալիտ) բարձր ճնշման տակ մղվում է քրոմատոգրաֆիկ փաթեթավորման նյութով (ստացիոնար փուլ) սյունակի միջով: Նմուշի խառնուրդը տեղափոխվում է հելիումի կամ ազոտի շարժվող գազային հոսքով:
Նկար 02. HPLC (բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատագրություն)
Նմուշի խառնուրդի բաղադրիչները, որոնք ամենաքիչ փոխազդեցությունն ունեն անշարժ փուլի հետ կամ ամենաշատ փոխազդեցությունը շարժական փուլի հետ, ավելի արագ դուրս կգան սյունակից: Մյուս կողմից, նմուշային խառնուրդի բաղադրիչները, որոնք ունեն ամենաշատ փոխազդեցությունը ստացիոնար փուլի հետ կամ նվազագույն փոխազդեցությունը շարժական փուլի հետ, ավելի դանդաղ դուրս կգան սյունակից: Ելնելով վերը նշված փոխազդեցության սկզբունքից, նմուշի խառնուրդի բաղադրիչները կարող են առանձնացվել:Ավելին, գործիքի դետեկտորը նույնականացնում է նմուշի խառնուրդի յուրաքանչյուր բաղադրիչ, որը դուրս է գալիս սյունակից: HPLC-ն օգտագործվում է շրջակա միջավայրի և կենսաբանական նմուշները ստուգելու համար հայտնի միացությունների առկայության կամ բացակայության համար, ինչպիսիք են դեղերը, տոքսինները կամ թունաքիմիկատները: Այն օգտագործվում է տարբեր ոլորտներում, ինչպիսիք են դեղագործական, բնապահպանական, դատաբժշկական և քիմիական նյութերը:
Որո՞նք են նմանությունները FPLC-ի և HPLC-ի միջև:
- FPLC-ն և HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակներ են:
- Երկուսն էլ օգտագործվում են կենսաբանական նմուշները առանձնացնելու և նույնականացնելու համար:
- Ունեն հեղուկ շարժական և պինդ անշարժ փուլ։
- Երկու տեխնիկան էլ օգտագործում է սյունակ՝ նմուշի միջով անցնելու համար:
- Այս տեխնիկան օգտագործում է պոմպեր, դետեկտորներ, փականներ և ծրագրակազմ նմուշների տարանջատման և հայտնաբերման համար:
Ո՞րն է տարբերությունը FPLC-ի և HPLC-ի միջև:
FPLC-ը հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որն օգտագործվում է խոշոր կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են սպիտակուցները, նուկլեոտիդները և պեպտիդները մաքրելու համար:HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որն օգտագործվում է փոքր մոլեկուլային քաշով միացությունները առանձնացնելու համար: Այսպիսով, սա FPLC-ի և HPLC-ի հիմնական տարբերությունն է: Ավելին, FPLC-ն օգտագործում է pH-ի և հաղորդունակության մոնիտորներ, ինչպես նաև որպես ֆրակցիոն կոլեկտորներ: Ի հակադրություն, HPLC-ն չի օգտագործում pH-ի և հաղորդունակության մոնիտորներ և ֆրակցիոն կոլեկտորներ:
Ստորև բերված ինֆոգրաֆիկան ցույց է տալիս ավելի շատ տարբերություններ FPLC-ի և HPLC-ի միջև աղյուսակային տեսքով:
Ամփոփում – FPLC vs HPLC
Քրոմատոգրաֆիան լաբորատոր անալիտիկ տեխնիկա է, որն օգտագործվում է բաղադրիչները խառնուրդից առանձնացնելու համար: Այն բաժանված է մի քանի տեսակների, ինչպիսիք են սյունակային քրոմատագրությունը, գազային քրոմատագրությունը, հեղուկ քրոմատոգրաֆիան, իոնափոխանակման քրոմատոգրաֆիան և այլն: FPLC-ն և HPLC-ն հեղուկ քրոմատագրման տեխնիկայի երկու տեսակ են: FPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որն օգտագործվում է խոշոր կենսամոլեկուլները, ինչպիսիք են սպիտակուցները, նուկլեոտիդները և պեպտիդները մաքրելու համար: Մյուս կողմից, HPLC-ն հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տեսակ է, որն օգտագործվում է փոքր մոլեկուլային քաշի միացությունները առանձնացնելու համար:Այսպիսով, սա ամփոփումն է, թե որն է տարբերությունը FPLC-ի և HPLC-ի միջև:
