Տարբերություն Մաքսամ Գիլբերտի և Սանգերի հաջորդականության միջև

2024 Հեղինակ: Alex Aldridge | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-17 13:41

Հիմնական տարբերություն – Մաքսամ Գիլբերտ ընդդեմ Սանգերի հաջորդականություն

Նուկլեոտիդները ԴՆԹ-ի հիմնական կառուցվածքային միավորներն են և շինանյութերը: ԴՆԹ-ի մոլեկուլը կազմված է պոլինուկլեոտիդային շղթայից։ ԴՆԹ-ում հայտնաբերված են չորս տարբեր նուկլեոտիդներ: Այս նուկլեոտիդները կազմված են չորս տարբեր ազոտային հիմքերից՝ A (ադենին), G (գուանին), C (ցիտոզին), T (տիմին): ԴՆԹ-ի մոլեկուլում նուկլեոտիդների կարգը մեծ նշանակություն ունի, քանի որ այն կոդավորում է օրգանիզմների աճի և զարգացման համար կարևոր գենետիկական տեղեկատվություն: ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը վերաբերում է գործընթացին, որը որոշում է ԴՆԹ-ի ճշգրիտ նուկլեոտիդային հաջորդականությունը: Կան ԴՆԹ-ի հաջորդականության տարբեր մեթոդներ:Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականությունը և Սանգերի ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը ԴՆԹ-ի հաջորդականության երկու մեթոդ են, որոնք պատկանում են առաջին սերնդի հաջորդականությանը: Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականացման ընթացակարգը որոշում է բազային հաջորդականությունը՝ քիմիապես կտրելով 5' ծայրով պիտակավորված ԴՆԹ-ի բեկորները, նախապատվությունը տալով չորս նուկլեոտիդներից յուրաքանչյուրին և գելային էլեկտրոֆորեզին: Sanger հաջորդականացման ընթացակարգը որոշում է նուկլեոտիդների հաջորդականությունը՝ սինթեզելով միաշղթա ԴՆԹ՝ օգտագործելով ԴՆԹ պոլիմերազ և դիդեօքսինուկլեոտիդներ և գելային էլեկտրոֆորեզ: Սա հիմնական տարբերությունն է Մաքսամ Գիլբերտի և Սանգերի հաջորդականության միջև:

Ի՞նչ է Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականությունը:

Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականությունը, որը նաև հայտնի է որպես քիմիական հաջորդականության մեթոդ, տեխնիկա է, որը մշակվել է ԴՆԹ-ում նուկլեոտիդների հերթականությունը որոշելու համար: Այս մեթոդը ներդրվել է Ուոլտեր Գիլբերտի և Ալան Մաքսամի կողմից 1976 թվականին և հայտնի դարձավ, քանի որ այն կարող է իրականացվել ուղղակիորեն մաքրված ԴՆԹ-ով: Մաքսամ Գիլբերտի մեթոդը պատկանում է ԴՆԹ-ի հաջորդականության առաջին սերնդին, և դա առաջին հաջորդականության մեթոդն էր, որը լայնորեն օգտագործվում էր գիտնականների կողմից:

Այս մեթոդի հիմնական սկզբունքը կայանում է նրանում, որ վերջում պիտակավորված ԴՆԹ-ի բեկորները որոշակի հիմքերում սահմանափակվում են բազային հատուկ քիմիական նյութերով և պայմաններով և պիտակավորված բեկորների բաժանումը էլեկտրոֆորեզով, ինչպես ցույց է տրված նկար 01-ում: Բեկորները բաժանվում են ըստ գելի վրա իրենց չափսերով: Քանի որ բեկորները պիտակավորված են, ԴՆԹ-ի մոլեկուլի հաջորդականությունը կարելի է հեշտությամբ եզրակացնել:

Մաքսամ Գիլբերտի մեթոդը օգտագործում է բազային հատուկ քիմիական նյութեր՝ հատուկ հիմքերում ԴՆԹ-ն կոտրելու համար: Երկու սովորական քիմիկատներ՝ դիմեթիլ սուլֆատ և հիդրազին քիմիկատներ, օգտագործվում են համապատասխանաբար պուրինների և պիրիմիդինների ընտրովի հարձակման համար:

Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականության մեթոդն իրականացվում է մի քանի քայլերի միջոցով՝ հետևյալ կերպ.

1. ԴՆԹ-ի հաջորդականության մաքրում սահմանափակող էնդոնուկլեազների միջոցով
2. ԴՆԹ-ի բեկորների ծայրերի պիտակավորում ռադիոակտիվ ֆոսֆատների ավելացմամբ
3. Պիտակված բեկորների մաքրում չպիտակավորված բեկորներից գելային էլեկտրոֆորեզով
4. Վերջով պիտակավորված ԴՆԹ-ի բաժանում չորս խողովակի և մշակում բազային հատուկ քիմիական նյութերով առանձին
5. Յուրաքանչյուր խողովակի պարունակության էլեկտրոֆորեզ առանձին գծերի վրա գելի վրա և բեկորների բաժանում ըստ դրանց երկարության:
6. Դրվագների հայտնաբերում ավտոռադիոգրաֆի միջոցով:

Նկար 01. Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականություն

Ի՞նչ է Sanger Sequencing?

Sanger Sequencing-ը հաջորդականության մեթոդ է, որը մշակվել է Ֆրեդերիկ Սանգերի և նրա գործընկերների կողմից 1977 թվականին՝ որոշելու տվյալ ԴՆԹ-ի բեկորի հիմնական հաջորդականությունը։ Այն նաև հայտնի է որպես շղթայի ավարտման հաջորդականություն կամ Dideoxy sequencing մեթոդ: Այս մեթոդն աշխատում է շղթայական վերջավորվող դիօքսինուկլեոտիդների (ddNTPs), ինչպիսիք են ddGTP, ddCTP, ddATP և ddTTP, ընտրովի ներառման սկզբունքով ԴՆԹ պոլիմերազի միջոցով միաշղթա ԴՆԹ-ի սինթեզի ընթացքում՝ շղթայի ձևավորումը դադարեցնելու համար:Դիդեօքսինուկլեոտիդներին բացակայում են 3' OH խմբերը հարակից նուկլեոտիդների հետ ֆոսֆոդիստերային կապերի ձևավորման համար: Հետևաբար, շղթայի ձևավորումը դադարում է, երբ ddNTP-ն ընդգրկվում է նոր ձևավորվող շղթայի մեջ՝ սանգերի հաջորդականության ընթացքում:

Այս մեթոդով չորս առանձին ԴՆԹ սինթեզի ռեակցիաներ (PCR) կատարվում են չորս առանձին խողովակներում՝ մեկ տեսակի ddNTP-ով: Այլ պահանջներ են ներկայացվում նաև PCR-ի համար խողովակների համար, ներառյալ պրայմերները, dNTP-ները, Taq պոլիմերազը, հատուկ պայմանները և այլն: Չորս առանձին ռեակցիաներ են իրականացվում չորս խողովակներում՝ չորս խառնուրդներով: PCR ռեակցիաներից հետո ստացված ԴՆԹ-ի բեկորները ջերմային ձևափոխվում են և առանձնացվում գելային էլեկտրոֆորեզով: Այնուհետև բեկորները վիզուալացվում են՝ օգտագործելով պիտակավորված (ռադիոակտիվ կամ լյումինեսցենտ) այբբենարան կամ dNTPs, ինչպես ցույց է տրված նկար 02-ում:

Նկար 02. Սանգերի հաջորդականություն

Ո՞րն է տարբերությունը Maxam Gilbert-ի և Sanger Sequencing-ի միջև:

Մաքսամ Գիլբերտ ընդդեմ Սանգերի հաջորդականություն
Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականությունը ԴՆԹ-ի հաջորդականացման համար մշակված առաջին տեխնիկան է:	Սանգերի հաջորդականության մեթոդը ներդրվել է Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականացման մեթոդից հետո։
Օգտագործում
Այս մեթոդը հազվադեպ է օգտագործվում:	Sanger հաջորդականությունը սովորաբար օգտագործվում է հաջորդականության համար:
Վտանգավոր քիմիական նյութերի օգտագործում
Այն օգտագործում է վտանգավոր քիմիական նյութեր։	Վտանգավոր քիմիական նյութերի օգտագործումը սահմանափակ է Մաքսամ Գիլբերտի մեթոդի համեմատ:
Պիտակավորում հայտնաբերման համար
Այս մեթոդը օգտագործում է ռադիոակտիվ P32 ԴՆԹ-ի բեկորների ծայրերը պիտակավորելու համար:	Sanger հաջորդականությունը օգտագործում է ռադիոակտիվ կամ ֆլուորեսցենտային պիտակավորված ddNTPs:

Ամփոփում – Մաքսամ Գիլբերտ ընդդեմ Սանգերի հաջորդականություն

Մաքսամ Գիլբերտը և Սանգերի հաջորդականությունը ԴՆԹ-ի հաջորդականության երկու տեսակ են, որոնք մտնում են առաջին սերնդի ԴՆԹ-ի հաջորդականության ներքո: Մաքսամ Գիլբերտի հաջորդականությունը ԴՆԹ-ի հաջորդականացման համար առաջին մեթոդն է, որը ներդրվել է 1976 թվականին, և այն իրականացվում է ԴՆԹ-ի վերջում պիտակավորված բեկորները բազային հատուկ քիմիական նյութերի միջոցով կոտրելու միջոցով: Հետևաբար, այն հայտնի է որպես քիմիական հաջորդականություն: Սանգերի հաջորդականության մեթոդը ներդրվել է 1977 թվականին և հիմնված է ddNTP-ով պայմանավորված շղթայի ավարտման ռեակցիաների վրա: Sanger հաջորդականության մեթոդը հայտնի է, քան Maxam Gilbert մեթոդը, քանի որ Maxam Gilbert մեթոդի մի քանի թերությունները, ինչպիսիք են ժամանակի չափազանց մեծ սպառումը, վտանգավոր քիմիական նյութերի օգտագործումը և այլն:Սա է տարբերությունը Մաքսամ Գիլբերտի և Սանգերի հաջորդականության միջև։